为什么BV2细胞总是极化？
梧桐疏雨OBDU
- BV2细胞去年10月购自北京协和医学院基础所，到达后按说明书处置，传代两次后冻存。
- 冻存液：90%澳洲胎牛血清+10%DMSO。经4℃半小时、-20℃两小时、-80℃一周，梯度降温存放至液氮中。
- 今年3月需要使用BV2细胞进行实验，遂复苏。复苏方法：将快速水浴融化的细胞悬液加入培养皿（Corning，100mm）中，加完全培养基至10ml，置培养箱中培养4小时，换液。
- 复苏后细胞状态尚可，增殖速度快。约1.5-2天传代一次，1传4-6，消化时间约室温1.5min
- 但培养3-4代后，NO水平升高，镜下细胞出现“长角”现象，重复尝试未发现原因。更换可稳定培养RAW264.7细胞的操作者可将其出现时间轻微延后（约1-2代）
- 血清均GIBCO，由南美胎牛换为北美胎牛效果不大
- 培养基：DMEM高糖（GIBCO）+10%血清
- 胰酶：GIBCO，0.05%（说明书建议）
- 求教各位大佬，还有其他方法可以减少极化激活吗？
- 另外小老师操作时使用同一胰酶，但表示消化困难，需消化3min，仍然较难吹打下。我只需要消化1.5-2min，可很顺利吹打下来，甚至感觉消化时间略长
4 个回答
是TTT
有帮助
你传代太稀了，按1:2~1:4传代，并且两天更换一次培基可以减少极化现象产生
huarenqiang5
有帮助
考虑可能存在潜在微生物污染，刺激细胞自分化或使用的胎牛血清内毒素高，内毒素刺激细胞自分化导致。
土井挞克树
有帮助
bv2细胞在换培养液时，感觉把原来的培养液全部倒掉，用PBs洗两遍然后再加入新的培养液可以避免极化
dxyc42u
有帮助
消化时间长了后细胞消化过度确实会出现极化
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