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可以根据不同细胞贴壁时间不同来筛选或者根据细胞生长特性添加生长因子或者药物来筛选。还有就是流式分选。如果在原代培养时,经过筛选后仍然存在大量非需要的细胞,您可以尝试继续原代培养。
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关键看要根据细胞的什么性质来筛选。
最简单的,根据大小,则可用细胞过滤网。
根据贴壁特性,只要使用贴壁类型的培养皿,就可以分离贴壁和悬浮类型的细胞。使用胰酶快速消化,则可以分离贴壁能力较强和较弱的细胞。
根据对特定生长因子的需求,也可以用特别的培养液配方来筛选细胞。
用流式细胞仪。如果目标蛋白本身是荧光蛋白,可以直接筛选。否则的话,使用荧光标记的抗体染色以后筛选。
用磁性细胞分选仪。原理同2类似,只不过识别目标蛋白的抗体是偶联在微小的磁珠上面,而分离过程使用磁柱来吸附与磁珠相结合的细胞。
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如果在原代培养时,经过筛选后仍然存在大量非需要的细胞,您可以采用以下几种方法:
继续进行原代培养:您可以继续进行培养,并在培养过程中逐渐清除非目标细胞。这种方法需要时间,并且可能会影响您的实验结果。
贴壁分离法:您可以使用贴壁分离法将目标细胞与非目标细胞分离。该方法涉及将混合细胞悬液加入培养皿,并使目标细胞贴附在培养皿底部。然后您可以将非目标细胞移除,留下目标细胞继续培养。
免疫磁珠法:如果您的目标细胞表达特定的表面标记物,您可以使用免疫磁珠法来分离它们。该方法涉及使用磁珠偶联到特定抗体上,将这些抗体与目标细胞表面的标记物结合,然后用磁场将这些细胞分离出来。
细胞分选仪:细胞分选仪是一种能够对细胞进行高效分离的设备。该设备利用细胞的生物学特性,例如大小、形状、荧光等,将目标细胞从非目标细胞中分离出来。这种方法适用于需要分离较小数量的目标细胞,例如肿瘤细胞。
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可以根据不同细胞贴壁时间不同来筛选或者根据细胞生长特性添加生长因子或者药物来筛选。还有就是流式分选