细胞培养背景有不会动的黑点，是怎么回事？

细胞营养不良，生长状态欠佳，或细胞老化都有可能在培养过程中出现小黑点。通常经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会误认为血清遭受污染，而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“，但在37℃环境下，又会使此沈淀物增多，更会误认为微生物之增殖。

细胞碎片

化学或者物理的强烈刺激（例如胰酶消化时间过长，吹打细胞太过用力等）往往会导致细胞死亡，产生很多的细胞碎片。在显微镜下进行观察时，可以看到很多呈不规则形态、没有光泽的颗粒粘附在细胞培养皿的底部。

状态不好的细胞往往贴壁能力较强，因此切勿用移液器进行强力的吹打，从而损害了健康的细胞；另外，控制好胰酶消化的时间，只需保证大部分正常的细胞被消化下来就可以了，然后更换新的细胞培养皿。

凋亡小体

体外培养的动物细胞很容易受到培养环境因素的影响，例如营养成分的改变、氧的供给、毒素、细胞代谢产物的积累、pH、 剪切力、细胞密度及微生物污染等。这些环境的改变都有可能诱发细胞的凋亡，从而产生很多分泌的凋亡小体。凋亡小体大多游离在培养基中，但也有一些会通过暴露的核酸彼此之间相互黏连，从而形成一个棕色的凋亡小体团块，没有细胞光泽。

建议：

细胞培养的过程中一定要控制细胞传代的时间，不能让细胞"长过"；不要使用过酸或者过碱的培养基进行细胞培养；选用内毒素含量较低的血清。

不会动的黑点一般是细胞碎片，可以用pbs清洗去除

一种可能是存在支原体污染，一种可能是细胞状态不好，比如传代时消化时间长了，吹打太久，或者铺板的时候细胞太稀疏了，这些情况一般传代3-4天左右会好转。支原体污染的话会越来越严重