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        如何进行T淋巴细胞体外培养法?

        相关实验:🔥 原代细胞培养实验

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        孤木_成舟


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        2 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        T淋巴细胞体外培养法T淋巴细胞转化试验(T细胞增殖试验)

        实验步骤

        1. 小鼠脾细胞悬液的制备

        取一个灭菌的平皿,加入5 ml Hank's液。颈椎脱臼法处死小鼠,取脾脏,放入平皿中,在钢网上研磨并过筛,制成细胞悬液。取出100 μl用于计数。将其余细胞悬液移入一离心管中,离心1500 rpm,7 min,(或1000 rpm,10 min)弃去上清,用RPMI1640 培养液稀释,制成2.5×106 /ml的脾细胞悬液,然后加入ConA使每孔最终浓度为2 μg/ml,同时做不加ConA的阴性对照孔。

        2. 将上述细胞悬液加入96孔平底培养板中,每孔0.1 ml。

        3. 将培养板放入含有5 %CO2的37 ℃培养箱中培养48-72 小时,在培养结束前4-6 小时,于培养板各孔内加入1 mg/mlMTT液,10 μl/孔。37 ℃培养6 小时。

        4. 各孔内加入0.01 M 盐酸—异丙醇110 μl,30 分钟内(或加2 %SDS100 ul/孔,过夜)用酶标测定仪测OD 值,测定波长570 nm。淋巴细胞与某种刺激物在体外培养时,细胞内DNA和蛋白质合成增加,出现一系列增生性变化:细胞变大,胞浆增多,出现空泡等。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是一般的T淋巴细胞体外培养方法:

        首先从新鲜的外周血或淋巴组织中分离T淋巴细胞。可以使用密度梯度离心或磁珠分离等方法。

        用RPMI 1640等适合T淋巴细胞培养的培养基配制培养液,加入10%的胎牛血清或其他适当的血清。此外,还应加入必需的氨基酸、维生素和其他营养物质。

        将分离后的T淋巴细胞加入培养液中,密度应该控制在2×10^5-2×10^6 cells/mL范围内。

        添加合适的激活剂,如PHA、Con A、IL-2等,以激活T淋巴细胞增殖和分化。激活剂的浓度可以根据实验需要进行调整。

        将培养液和T淋巴细胞转移到培养皿中,通常使用96孔板、24孔板或25cm^2 培养瓶等。

        通常在体外培养的过程中,需要定期更换培养液以保持营养物质的充足,通常每2-3天更换一次。

        培养时间和条件可以根据实验需要进行调整,通常在体外培养3-7天。

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