贴壁细胞如何驯化成悬浮细胞？

贴壁细胞驯化成悬浮细胞的方法有很多种，具体的实验步骤和条件可能因细胞类型而异。常见的方法包括液体培养、酶分离、离心等。

在液体培养中，通常需要将贴壁细胞移植到培养皿中，并在适当的时间内进行培养。在这种方法中，细胞会自动从培养皿表面脱离，形成悬浮细胞。

酶分离法则是通过使用特定的酶将细胞膜切割来实现驯化。离心法通过在高速下离心来将贴壁细胞离开培养皿表面。

如果你已经尝试了这些方法并且仍然无法成功驯化，建议检查实验条件是否正确，如细胞培养基类型、温度、湿度、培养时间等，或者可能需要尝试其他方法。

293T细胞是一种高效的细胞表达系统，通常不会有驯化问题，但是最终是否成功驯化还要看实验条件。

驯化细胞最需要的是耐心。同时使用专为悬浮培养细胞而改良的培养液是关键。可先从250m1至1000m1的转瓶开始驯化，或玻璃瓶加磁力搅拌子（50-100转），培养液加半满。改良的专用于悬浮细胞培养液，通常减掉钙离子、镁离子，避免细胞聚集成团。还需添加抑制泡沫形成剂。玻璃瓶需先进行硅化，防止细胞粘到玻璃壁上。

早期贴壁准备的时候可以适当增加细胞密度

保持120h活细胞密度增加不小于5倍,且活率高于95%,即可完成驯化,再经过至少5代摇瓶传代驯化培养后,即得到全悬浮细胞系。

驯化细胞最需要的是耐心，同时使用专为悬浮培养细胞而改良的培养液是关键。