• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        【求助】神经干细胞培养一定要加EGF吗?

        相关实验:🔥 原代细胞培养实验

        user-title

        魚鱻魚yu

        各位战友,本人在一开始培养NSCs的时候只购买了bFGF,配方为:

        DMEM/F12+2%B27+bFGF(20 ng/ml)+1%双抗

        步骤如下:

        1、孕16 d sd大鼠脱颈椎处死,取胎鼠皮层;

        2、木瓜蛋白酶(2 mg/ml)37℃消化30 min,10%FBS培养基双倍体积终止消化后,5 ml巴氏吸管吹打十次,离心(200xg,5 min)去上清;

        3、HBSS重悬,并用40 um细胞筛过滤,细胞悬液离心(200xg,2 min)去上清;

        4、细胞计数,按照5x10^6接种于100 mm皿内

        一般第二天成球,在园子里潜水了一段时间,发现各位战友都加了EGF,只有很少几位提到没加。大部分文献也加了,偶有几篇英文文献也没加,所以比较纠结的是后续要不要加

        目前我的状况是原代第二天就能见到球,也染过nestin(+),但观察到各位战友接种密度很小,我又比较怀疑这些球是聚集在一起的还是增殖的

        原代第二天🔽图片描述后期🔽:图片描述

        之前我也试过1x10^6,细胞长得很慢,又去找了gibco的培养方案,里面提到神经球悬浮培养:

        图片描述
        还有一个很大的困难,干细胞球咋弄成单细胞悬液,试过园子里的将吸管拉长、干细胞分离液等等方法,还是不太行
        wx-share
        分享

        2 个回答

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        可以不加,可以加入5-氮胞昔(5-azacytidine,5AzaC,NGF或BDNF,BDNF具有明显促进神经元突起生长的作用。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        EGF并不是唯一必须的。

        除了 EGF 外,还需要 bFGFo Carpenter 等在含 EGF、bFGF 和 LIF 的无血清培养基中培养的人类神经干细胞,能存活达1年以上,并仍然保持其分化潜能。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序