冰冻切片免疫荧光求助！杂信号特别多

近期做小鼠冰冻切片免疫荧光，之前染出来的片子一直很好，基本没有杂信号，但是最近做的一整批5只小鼠片子染出来后杂信号特别多。就是下图中的红点点。染的是C57小鼠脑组织海马区p-tau。

下图是同一批染色得到的没有杂信号的阳性信号图。

感觉杂信号已经超过我本身阳性信号的强度了，特别影响阳性信号的采取。

想求助下各位大佬，杂信号多与切片有没有关系，一起染色的前一批的片子没有杂信号，阳性信号也比较明显，感觉可以排除PBS洗不干净，显微镜共同操作下的等问题，两批片子的区别就在取材、固定、包埋和切片。

怀疑以下几个问题：

1.取材时灌注不干净，但不应该5只鼠都没灌注好，并且之前同样的方法灌注没有出现过问题

2.采用的是液氮速冻包埋，由于取材时间过长，脑组织在冰的PSB中泡的比较久，大概两小时左右，然后才OTC包埋速冻，不知道这个会不会有影响

3.切片时片子不平，切完片且贴片时有细细密密的小褶皱，不知道这些小褶皱会不会使杂信号过多

或者有没有大佬知道杂信号还可能因为什么，还请大佬救救孩子吧！