细胞冻存后，复苏效果有时不太好？还有，细胞有时候有黑点？

细胞冻存管融化

1.将细胞冻存管取出，浸入37℃水浴锅内，轻轻晃动，注意融化，当融得只剩一个小冰块时，将细胞插入冰中。

2.加入4℃预冷的培养基，用手指轻弹悬浮细胞团。

3.250g离心10min，去除上清液，再加入培养基，轻轻悬浮。

4.尽量将细胞中的DMSO洗去，计数。过程一定要慢，DMSO能减少冰晶伤害。在细胞复苏过程中，要快，以减少融化对细胞的伤害，其实还是冰晶的问题。DMSO浸润的细胞非常脆弱，所以可要尽快将DMSO去除。

遵循慢冻速溶，放液氮保存，一般没问题，细胞有小黑点可能是血清不好，换一下血清

1，细胞冻存前状态就不好

2，冻存操作不规范

3，刚复苏状态不好有黑点其实也属正常，传两代养着养着就好了

4，可以尝试使用无血清冻存液，效果挺好的。

复苏效果不太好是不是操作不规范或者细胞数目太少。

黑点需要鉴别是污染还是细胞碎片。

细胞数太少，细胞也会害怕孤独，健康生长需要细胞间的连接，冻存时细胞浓度低于1-undefined105个/ML，复苏很难成功的。解决：细胞计数，离心后调整细胞浓度。记得不要重新洗细胞，刚复苏的细胞比较脆弱。

AR42J细胞冻存后有一定复苏难度。因其生长非常慢，不易贴壁，从复苏到正常培养传代这个过程，通常需要10~14天，需要多一点耐心；复苏第2天可观察漂浮的细胞，状态是否良好。第4~5天有少量贴壁，且有密度依赖；细胞增殖过程中会产生少许细胞碎片和黑点，这属于正常现象，及时换液除去即可；每2~3天换液一次。