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        求助,percoll分离骨骼肌干细胞不分层

        相关实验:支原体的分离培养鉴定

        user-title

        Z172088

        用percoll分离干细胞分离依次加入80%2ml,20%6ml,和细胞悬液2ml,800g,2400转30分钟,结果都是最底层有杂质,细胞混悬液在上面。

        想问一下大家,依次加入液体的时候你们会看到不同密度的percoll液体有分层吗?我用1ml试管加没看到。

        离心结果类似这种的,只是10ml多一些

        我这个问题出在哪里呢?

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        2 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        我是这样操作的,你可以参考一下。

        1.用percol将10XPBS稀释为1X (得到的我们暂且称100% Buffer A好了)

        2.再用无血清的培基去稀释100% Buffer A为2份,一份为75% Buffer A,另一位为35% Buffer A

        3.肝脏细胞离心后得到沉淀,去除上清后,先用35% 的Buffer将其冲悬,接着用移液将75%的Buffer缓慢从底部打出,期间可以看到75%与35%的分层

        4.1000G 离心20 mins(还要把离心机上升和下降的速度调为0,所以总共的离心时间大概有40-50分钟)

        5.取出即可看到分层。

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        加percoll时要慢,加快了很容易混一起

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