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        STO饲养细胞制备

        相关实验:iPS细胞制备技术

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        RETTTTZ

        我在细胞长满后,用1ug/ml的mmc处理12h后,用pbs清洗3遍后,使用0.05e消化4min,离心后用fbs:dmso 9:1的冻存液冻存,但是复苏后细胞长2-4天就出现了明显的死亡,根本不能正常培养干细胞

        之前按这个方法做的饲养细胞没有问题,但这次做的就不行,所以材料操作均没有改变,想知道大家有遇到这种情况的吗,是怎么解决?图片描述

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        3 个回答

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        huarenqiang5

        有帮助

        考虑是你是不是离心时间的问题或其他操作方面的问题导致。

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        试试用高浓度的丝裂霉素C(10mg/ml MMC)处理4h,低浓度的mmc处理12h太长了,效果并不好

        user-title

        RETTTTZuser-title

        图片描述

        图片描述

        sto1是之前制作没有问题的,用的也是1ug/ml处理12h

        sto2、3是新做的,分别用的10ug/ml处理3h和1ug/ml处理12h,其他条件都一样,但细胞状态在第4d就明显变差,也不能正常培养干细胞

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        降低细胞密度后,多用pbs清洗几次。

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