不同时间点刺激细胞实验设计

细胞实验中，观察不同时间点（0h,24h,48h)某药物对某蛋白表达的影响，有以下疑问，往大家指导：

1.每个时间点都要设置自己的对照吗？

（0h给药组-0h不给药物组，24h给药组-24h不给药物组，48h给药组-48h不给药物组）

2.给药时间：是同一时间给药，分别在24h后,48h后收样；

还是以时间轴倒着给药（收样前24小时给药，收样前48小时给药），一起收样？

3.0h应该怎么处理，给药后立刻收样吗？那这样0h给药组和0h不给药组蛋白表达是不是一样的？

4.第一个问题中如果都设置自己的对照，在统计分析时是与各自时间点的对照进行比较吗？纵向怎么比较？

求给予指导，谢谢！