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        怎样利用PI单染色法进行流式细胞仪检测细胞凋亡?

        相关实验:药物对动物腹腔巨噬细胞的影响实验

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        dxy_lkkcoxh7

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        3 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        收集细胞{数目约(1~ 5)×106个/mL},500~ 1000 r/min离心5min,弃去培养液。3ml PBS洗涤1次。离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1—2小时。离心弃去固定液,3mlPBS重悬5min。400目的筛网过滤1次,500—1000r/min离心5min,弃去PBS。用1ml PI染液染色,4℃避光30min。流式细胞仪检测:PI用氩离子激发荧光,激光光波波长为488nm,发射光波波长大于630nm,产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        在以PI荧光强度(代表DNA量)为横坐标的柱状图上,一般会有2个峰,G1和G2,G1就是正常细胞,G2是正在分裂的2倍体。2者间是S期细胞。如果有凋亡的细胞,在G1前会有细胞出现,就是DNA含量少于正常细胞的凋亡细胞。

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        府宅

        有帮助

        这个方法看凋亡,主要是看sub-G1期的细胞数量。原理就是凋亡的细胞,由于DNA正在降解,所以含量比正常细胞要少。

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