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        Chip 实验中,为什么input没有条带?ip跑出来位点不同?

        相关实验:芯片技术

        user-title

        dxy_7d4tlk84

        Up 扩增时cDNA 加的量不同(分别是5ul 10ul 20ul),跑胶时上样体积一样,但最后跑出来的结果位点不在同一水平上,这是为什么?还有input 也没有目的条带图片描述

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        3 个回答

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        如果input没有结果,先检查样本本身是否可信,PCR反应条件/体系是否正确;然后才能进一步分析

        user-title

        粥辰辰辰辰

        有帮助

        增加上样量呢,coip富集目的蛋白太多了 momo,还不行的话把input组的膜剪下来单独曝光。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        原因可能有以下几点:


        1. Input没有条带:

        - Input DNA模板量太低,在PCR扩增过程中扩增不足以见到条带。可以适当提高Input DNA的模板量。


        2. IP结果条带位置不一致:

        - cDNA反转录时用的量不同,导致最终扩增产物量不同,条带位置不一样。应保证各样本cDNA反转录量一致。


        - PCR扩增循环数不同,也会导致扩增产物量不同。应该对各样本进行同样的PCR循环数。


        - 上样量不一致也可能导致条带移位。应精心吸取使各样本上样体积一致。


        - 实验操作过程中样品之间出现交叉污染,也可能导致条带位置不一样。需注意试剂、管器之间的分开。


        综上,对Input和IP样本,在反转录、PCR扩增和电泳上样等环节,操作要规范一致,才能保证结果可比性,避免条带位置 biased。

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