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        【请教】双抗夹心层析,阴性阳性区分不开

        相关实验:流式细胞仪测定革兰阴性和革兰阳性细菌生理状态实验

        user-title

        长腿欧尼MGY4

        双抗夹心筛出抗体对之后,在测血清的时候,阴性和阳性区分不开。有正常梯度,但是梯度拉不开。

        包被液用的是PB+海藻糖

        结合垫处理液是Tris体系+S9

        样品垫处理液是四硼酸钠+酪蛋白钠+S9+PVP10

        微球保存液里面有酪蛋白钠、Pvp10,S9

        请各位老师指教一下!

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        2 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑是包被的问题,夹心包被的程度不够所以分不开

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        有几种可能的原因:

        特异性抗体的质量存在问题:可能特异性抗体没有正确地结合到支持物上,或者抗体质量存在问题,导致其与目标蛋白质的结合亲和力较弱,从而使阴性和阳性之间的差异无法区分。

        样品垫处理液的成分存在问题:您的样品垫处理液中包含四硼酸钠、酪蛋白钠、S9和PVP10。其中,四硼酸钠通常用于缓冲和维持样品的pH值,酪蛋白钠用于协助特异性抗体结合到目标蛋白质上,S9可以防止非特异性蛋白质与特异性抗体结合,而PVP10可以防止蛋白质的非特异性吸附。如果样品垫处理液中这些成分的浓度或配比存在问题,可能会影响到阴性和阳性之间的区分。

        其他实验条件存在问题:除了特异性抗体和样品垫处理液之外,其他实验条件,如温度、盐浓度、pH值等,也可能会影响到阴性和阳性之间的区分。

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