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        想问各位前辈,如何提取乙酰胆碱转移酶?

        相关实验:ELISA 实验

        user-title

        dxy_lp5ch9v5

        使用试剂盒,一般需要多少乙酰胆碱转移酶?如何提取?本人要提取褐飞虱的乙酰胆碱转移酶,谢谢各位前辈

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        3 个回答

        user-title

        晓雨知春来

        有帮助

        可以用柱层析提取法提取乙酰胆碱转移酶。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        常用的提取方法有:

        (1)柱层析提取法:有多种层析柱可供提取不同的神经肽,其中较为方便的是用Sep-pak C18层析柱提取。主要步骤:

        ①柱的预处理:该柱有两头,长头连接注射器,可注入溶液与样品,短头为排出口。预处理时注入乙腈10ml。蒸馏水20ml,使柱中的生物胶活化。

        ②注入样品(如血浆、脑脊液、腹水、尿等):样品中的水份流出,生物活性肽、蛋白及杂质等吸附在生物胶上。血浆上柱前,如先去除蛋白,可增加柱子的使用时间。

        ③淋洗:用4%HAC溶液100ml注入柱中,以洗去一些杂质。

        ④洗脱:用7ml酸性乙腈作为洗脱剂,注入柱中,把生物活性肽洗脱下来,收集在塑料指形管中。

        ⑤清洗:用乙腈、蒸馏水清洗柱子,以备后用。

        ⑥将洗脱液吹干,低温保存待测。测定时可加入一定量的缓冲液溶解。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是一般的提取步骤:

        1. 样本制备:收集褐飞虱样本,并将其组织(如整个体、器官或细胞)分离或粉碎。可以使用显微注射器、组织研磨器或其他适当的方法来处理样本。

        2. 组织破碎:将样本加入一个适当的缓冲液中,如磷酸盐缓冲液(PBS)。使用离心或超声波等方法,破碎组织细胞,释放出AChE。

        3. 离心:离心样本,以去除细胞碎片和其他固体颗粒。收集上清液,其中含有提取的AChE。

        4. AChE检测:使用商用AChE检测试剂盒,按照说明书中的步骤进行测定。根据试剂盒的不同,可能需要不同的乙酰胆碱转移酶的用量。请仔细阅读试剂盒的说明书,按照建议的用量进行操作。

        5. 分析数据:根据试剂盒的说明书,使用光度计或荧光测量仪等仪器,测量AChE的活性。根据提供的标准曲线,计算样本中AChE的活性。


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