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        跑WB时,曝片出现以下情况

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        dxy_7d4tlk84

        出现白斑,没有目的条带,封闭液用的是BSA封闭液,这是什么原因呢,图片描述

         

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        3 个回答

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        首先确定膜上是否有marker,有的话那可能是上样量不够或者抗体种属不对

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能有以下原因:

        蛋白质没有转移成功:可能是由于蛋白质在转移过程中未能充分转移到膜上,导致检测不到目的蛋白的条带。

        非特异性结合:可能是由于膜上存在非特异性的蛋白结合,导致蛋白质无法结合到膜上。

        染色过程中的问题:可能是由于染色过程中的缺陷导致无法正确检测目的蛋白。

        针对这些问题,可以考虑以下解决方案:

        确保蛋白质转移成功:可以尝试调整蛋白质转移的时间和电压,以保证蛋白质在转移过程中充分转移到膜上。另外,可以使用Ponceau染色检测蛋白质转移效果,以确定是否转移成功。

        减少非特异性结合:可以尝试优化抗体的浓度和选择更加特异性的抗体,以减少非特异性结合。

        检查染色过程:可以检查染色过程中是否存在缺陷,例如染色时间、抗体浓度等等。此外,可以尝试调整染色条件和更换其他的染色方法。

        另外,封闭液使用BSA封闭液一般是没有问题的,但是有时候BSA封闭液中的BSA可能存在污染,也可能会导致问题。因此,建议使用新鲜的BSA封闭液,并且在使用过程中注意对液体的保存和使用方式。

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        没有出来条带原因很多,如果同时做的其它蛋白都出来了只是这个蛋白没出来,那应该就是抗体孵育的问题,抗体浓度太低?二抗不行?有些抗体对ph要求比较高,抗体稀释液以及洗膜的buffer PH太高也会影响抗体的结合。

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