在做印迹实验多次出现信号低的情况怎么解决？

可能的原因及建议：

①你所检测的样本中不表达目的蛋白，选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性，同时查阅文献。

②检测样本低表达目的蛋白，提高上样量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。

③转移不完全或过转移，可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头；适当调整转膜的时间和电流。

④抗体不能识别测试种属的相关蛋白，购买抗体前应当认真阅读抗体说明书，确定其是否能够交叉识别测试种属的对应蛋白。

⑤一抗孵育时间不足，建议4℃结合过夜。

⑥二抗与一抗不匹配，选择针对一抗来源的种属的抗体。

⑦洗膜过度，洗膜时间不宜过长，加入的去垢剂不宜过强或过多，建议使用0.1%的弱去垢剂Tween-20。

如果信号低，可以增加上样量，或者提高抗体浓度。

解决方法：

将转膜后的胶染色确定转膜效率；同时可用丽春红染膜；

优化转印时间和电流，分子量大的蛋白可以适度延长转印时间；

实验中加入阳性对照和/或 Marker；

按照膜的使用说明预先润湿膜；

转膜过程中胶与膜完全接触，

转膜不完全和转膜过度都会导致转膜效率低，而导致在检测鉴定是出现信号弱的情况出现。优化转膜条件可有效提高转膜效率。