• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        求助:wb蛋白条带位置不对

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        实验小白者

        各位老师,我wb跑PD-L1,说明书分子量是40-50kd,我跑出来是70-100kd,跑了好几次还是这样,请求各位老师帮忙我这个实验小白😫(煮蛋白前加了还原型loading buffer,抗体是CST)图片描述

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你看一下cst说明书里,wb的条带在哪里,其实你只要跑过全膜,确定了你的位置,即使位置和预测的不一样,也是可以的,就是你的这个位置有点寸,咋感觉是你的lysis没有打开到一级结构,还是二聚体的感觉。因为40-50,70-100正好是二倍的感觉

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        凝胶与 Marker 等差异导致的轻微偏移。建议根据目的蛋白的大小选择合适的凝胶浓度,并且尽量选择知名厂商的 Marker。

        目的蛋白存在翻译后修饰,需要查询数据库及文献资料,了解目的蛋白是否存在翻译后修饰,例如磷酸化、糖基化、泛素化修饰等,这些均可能影响条带的位置。

        user-title

        迟C迟

        有帮助

        可能的原因有:

        1.胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度

        2.抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间

        3)酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物

        4)目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体,建议查询相关文献确定

        5)标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建议设置阳性对照比对结果,增加标本上样量

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序