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        扩增产物居然有很长的拖尾现象?

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        赵栋2012

        我用的是Taqman探针!我的引物TM分别是 50,52度,但我用三步法退火温度50度,和两步法退火温度60度都能扩增,两步法扩增效率更高一些!但我用两步法扩增后把扩增产物电泳后却发现,扩增产物居然有很长的拖尾现象!(扩增曲线却很好)请问这是什么原因?
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        1 个回答

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        tao0129

        有帮助
        使用Taqman探针做荧光定量PCR的产物一般都会做的很小,100 bp 多点吧,最大也不超过200 bp 的,你用的退火温度是50度,非特异扩增是不可避免的,即使引物的特异性很好,引物二聚体也肯定存在,而且大小和产物接近,所以在电泳的时候出现脱尾现象很正常。 为什么扩增曲线会很好呢?因为使用了Taqman探针,只有特异性扩增产物会产生荧光,把引物二聚体和非特异扩增都屏蔽了,所以扩增曲线会很好!另外,使用Taqman探针做荧光定量是不需要做熔解曲线的,只有用sybrgreen等荧光染料做定量PCR才需要通过熔解曲线来确定扩增的特异性,以判断定量结果是否准确。
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