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研究的最后还是要看基因表达产物无论是用于检测还是用于棉衣保护都需要将表达出的蛋白质分离和纯化然而蛋白质性质各异故纯化方法不同现共享一些基本的纯化方法以飨读者: 蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质，综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异，利用一种同时多种性质差异，在兼顾收率和纯度的情况下，选择蛋白质提纯的方法。 蛋白质在组织或 ...

一、凝胶过滤色谱： 一般来说，凝胶过滤色谱的结果好坏直接取决于凝胶柱的柱效（每米多少理论塔板数），而影响柱效的因素主要有： 1、凝胶本身性质： 每一种凝胶均有其合适的分离范围，应选择合适的凝胶进行分离。同样分离范围的凝胶颗粒越细的，柱效越高。 2、色谱柱装填的好坏： 凝胶过滤色谱柱装填完后，一般可以用丙酮（或NaCl）测定柱效和峰对称性，一般对于平均颗粒直径在30~34微米的Superose PG ...

一、融合表达蛋白的纯化： 融合表达蛋白可以在原目标分子之外带有GST肽段或（His）6肽段，从而使得可以分别用Glutathione Sepharose凝胶或Chelating Sepharose凝胶进行亲和色谱分子，一步可以达到~90%的纯度，经过特异蛋白酶切后，再进行离子交换及高分辨凝胶过滤一般便可以达到所需的纯度（95~99%）。 二、包含体表达蛋白的纯化： 在E.coli系统表达重组蛋白， ...

Downstream（下游）与上游相对的概念，一般而言，上游指基因克隆、细胞培养等目的产物表达工序，下游指从表达有目的产物的复杂的混合液中分离纯化得到符合要求的目的产物的一系列步骤。美、日、欧等发达国家生物技术产品工业化的实践证明：生物技术产品的产业化高度依赖于基因工程下游工序技术及设备的进步。 一、纯化工艺常用衔接技术： 1、盐析。常采用硫酸铵、硫酸钠盐析，获得的盐析沉淀物在低温冰箱(<- ...

随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易lIl。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说，分子克隆的下游工作显得更难，蛋白纯化工作非常复杂，除了要保证纯度外，蛋白产品还必须保持其生物学活性。纯化工 ...

蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤： （一）材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有： 1.机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。 2.渗透破碎法 这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。 ...

常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。 柱子可以分为：加压，常压，减压。 压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。 减压柱能够减少硅胶 ...

狭义来讲，提取指制备物与细胞固体成分或其它结合成分的分离，由固相转入液相或从细胞内生理状态转入外界特定溶液环境的过程，即分离前期被提取物从破碎的细胞中释放出来的过程。如果被提取物程固相或与固体结合，提取时由固相转入液相，常称为固液萃取；如果被提取物已经呈液相存在，提取时由一液相转入转入另一互不相溶的液相，这种方法称为液液萃取。 广义来讲，提取又可称为抽提或萃取，贯穿在整个分离纯化过程中，如核酸制备 ...

一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml 4.11Mtris-HCl（pH8）45ml 4.2甘油 ...

1.氨基酸（amino acid）：是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连在α-碳上。是蛋白质的构件分子。 2.必需氨基酸（essential amino acid）：指人（或其它脊椎动物）（赖氨酸，苏氨酸等）自己不能合成，需要从食物中获得的氨基酸。（一家写两三本书来） 3.非必需氨基酸（nonessential amino acid）：指人（或其它脊椎动物）自己能由 ...

1．30%丙烯酰胺溶液 【配制方法】 将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。 【注意】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和 ...

一、核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 化合物 分子量 λmax(pH7.0) ...

一、蛋白质分离的一般程序 蛋白质的种类、性质、所处体系以及蛋白质分离纯化的目的不同，因此，不可能有一个固定的程序适用于各类蛋白质的分离工作。但这并不意味着蛋白质的分离纯化没有一定的规律实际上多数分离纯化工作中都有相类似的步骤与手段。蛋白质分离纯化的一般程序： 生物体组织细胞→破碎→离心→盐析、等电点沉淀→凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析和高效液相层析。 二、 ...

优良的稳定性、灵敏度、精确度及制造过程中的可重复性，使得胶体金适合基于膜的检测技术。快速膜检测需求广泛，可应用于诸多领域（见下表）。随着灵敏度和特异性的提升，大量的潜在应用可能是作为替代昂贵仪器检测方法的低成本选择。快速检测的应用 临床医用变态反应心梗标志物退行性病变药物滥用 ...

水分亏缺是一种最普遍的影响植物生产力的环境胁迫，尽管蔬菜作物一般都在水源充足的地区栽培，但是通常蔬菜需水量大，而且几乎整个生育期对水分的要求都比较多；而果树大多栽培于丘陵、土地，更易受到水分亏缺的影响。因此深入研究植物的抗旱性，进行抗旱育种显得特别重要。 抗旱育种的成败在很大程度上取决于拥有抗性资源的多少和深入研究的程度，因此，种质资源的抗旱性鉴定、评价与筛选是抗旱育种的关键环节，受到世界各国育种 ...

一、目的 转氨基作用是植物界普遍存在的一种生化反应，它使蛋白质、氨基酸代谢与碳水化合物、脂肪等代谢沟通起来，在一定程度上起平衡蛋白质、脂肪等代谢的作用。研究植物体转氨基作用，可以使我们了解植物体不同发育阶段代谢动态的一个侧面，从而探索控制其代谢的途径。 二、原理 通过转氨基作用，α—氨基酸上的氨基可能转移到α—酮基的位置上，结果形成一种新的&a ...

一、目的 了解植物组织中提取蔗糖酶的方法，掌握蔗糖酶活力测定的原理。 二、原理 本实验以Nelson 方法测定酶活力，其原理是：蔗糖酶可将非还原性的蔗糖水解为葡萄糖和果糖，而葡萄糖作为还原糖含有的自由醛基，在碱性溶液中将Cu 2+ 还原，还原糖本身被氧化成羟酸；砷钼酸试剂与氧化亚铜生成蓝色复合物（砷钼蓝），在510nm 波长下有正比于还原糖浓度的光密度，从而确定蔗糖酶的活力，该法测定的范围为25 ...

原 理 植物体内通过转氨酶的作用，α-氨基酸上氨基可转移到α-酮酸原来酮基的位置上，结果形成一种新的α-酮酸和一种新的α-氨基酸，所生成的氨基酸可用纸上层析法检出。 试剂和器材 一、试剂 绿豆芽子叶及胚轴，0.1mol/L丙氨酸溶液，0.1mol/Lα-酮戊二酸溶液（用NaOH中和至pH7），含有0.4mol/L蔗糖的0.1mol/L ...

一、目的、原理 SO2是各种含硫石油和煤燃烧时的产物之一，是我国目前最主要的大气污染物，排放量大，对植物的危害也比较严重。通过本实验了解SO2对植物危害的症状和速度，也可初选出对SO2危害敏感植物和抗性植物，为监测大气SO2污染和进行厂区绿化提供依据。 SO2危害植物主要是从气孔进入叶肉遇水分解产生H2SO3，SO3和H2，前二者对二硫健、酶反映产生直接危害，并产生较重的间接伤害；后者降低PH值 ...

1. 目的 学习测定叶绿素总量及吸收光谱的技术 2. 器药品及材料 菠菜叶或其他新鲜叶子，80%丙酮、研钵、瓷漏斗、分光光度计、吸滤甁 3. 实验步骤 a) 绿素提取 称取0.5g鲜重切成小块的菠菜叶片。放于干净的研钵内。加20ml80%丙酮（V/V），把组织研成匀浆（大约研3分钟），小心地把绿色液体转移到一个有滤纸垫的瓷漏斗内。当过滤提取液时（抽滤），用另外10ml80%丙醇重复研磨匀 ...