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转移电泳是将经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出的蛋白质谱直接转移到硝酸纤维膜上，而形成固定相，并同时排除各种干扰物质，保持其天然构象和生物学活性，完成在凝胶中难以进行的各种生物试验。

高压电泳广泛地用于核苷、核苷酸、氨基酸、多肽、糖、生物碱、有机酸等的分离。

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琼脂凝胶结构均匀，含水量大，吸附量小，因此电泳速度快，电泳结果区带整齐，分辨率高，易染色，制成薄膜标本保存方便。所以琼脂凝胶电泳最常用。

醋酸纤维膜电泳是一项简便而又迅速的方法。它的优点是：①电泳区带分离清楚，比琼脂平板电泳分辨率高；②可以定量；③样品用量少，只需要几微升即可。

凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一，DNA的凝胶电泳和RNA 电 泳

DNA酶解技术的应用 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段原理及其操作

目的 研制成镧系元素发光时间分辨荧光分析中的关键试剂。方法 用过碘酸钠法研制成辣根过氧化物酶标记链霉亲和素,用戊二醛二步法研制成碱性磷酸酶标记链霉亲和素和用化学合成法研制成 5 - 氟水杨酸磷酸酯等关键试剂。结果 HRP 标记 SA 总蛋白回收率为29.8% ,纯度为 97% 。ALP 标记 SA 的总蛋白回收率为 56% ,纯度为98% ,分子量为159kD,其中 ALP 分子量为 94kD, 生物活性良好。5 - 氟水杨酸磷酸酯, 测得熔点为 157℃ ～159℃、纯度为 99.43% ～100% 、红外吸收光谱、紫外吸收光谱及核磁共振谱等特性鉴定与文献记载一致。结论 研制成的各种关键试剂质量良好,已成功地应用于科研中。

反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用最广泛的技术，主要是因为它适用于分析极大多数的非极性物质和很多的可离子化的及离子化合物。大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质，因此，分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的，含有疏水的机制也能以同样的保留方式分离。 固定相上还有少数物质，如混合相（例如苯基-己基）、末端封闭和非末端封闭种类和极性嵌入相也存在于这些键合硅胶上。还有很多填料用于反相 ...

色谱柱的维护 1、使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）。 2、流动相使用前必须经脱气和过滤处理。 3、避免流动相组成及极性的剧烈变化。 4、大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2～7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围。 5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存乙腈中。 6、压力升高是需要更换预柱或冲洗色谱柱的信号。 系统注意事项 1、 ...

一、问：这段时间一直在做生物碱，流动相选择的是乙睛：0.02mol/l磷酸二氢钾（26：74），现在实验做完了，最后冲柱子。先长时间乙睛：水冲柱，再用甲醇：水冲柱，最后用甲醇冲柱。柱压一直很高，请问各位，是否不该这样冲柱？该怎样解决？ Jimmy_ok：乙睛和甲醇没有多大区别的，只是乙睛黏度小，对于柱子保护有利，当然价格也高些，个人感觉完全可以用甲醇替代冲柱（当然实验室有钱就另说了）。从你的流动相 ...

按柱子说明书的方法去做即可，进口柱一般都有详细说明。不同品牌的柱子可能不尽相同。我的phenomenex色谱柱说明书上把氰基柱列为正相柱（其实也可用于反相色谱），保存时用异丙醇或正己烷。柱效下降时的清洗程序为：用做正相柱时其清洗过程为氯仿、异丙醇、二氯甲烷10倍柱体积依次冲洗；用做反相柱时其清洗过程为5%乙腈水溶液、四氢呋喃、95%乙腈10倍柱体积依次冲洗。 氨基柱的使用： 需要注意的是，氨基柱的 ...

1)． 严格过滤色谱纯流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气20～30分钟。 3)． 打开色谱工作站，连接好流动相管道，连接检测系统。 4)． 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，冲洗时速度不要超过10ml/min。 5)． 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大， ...

一台品质优良的液相色谱系统应从以下几个方面考虑： 一．主要技术指标优异 首先是如何看指标。液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等。我们认为要看主要技术指标，根据国家标准，仪器的主要指标有噪音，漂移，最小检测浓度，定性定量重复性等。这些指标都要放在系统，回路里去看，去比较。就是需要把各单元装置都要联接好，如接好色谱柱，进样阀，并且要通上流动相。因为您在分析中也都是联接好以后才可以进行分析 ...

某些国产仪器在公布其技术指标时，大多只写了“噪音和漂移”的指标。用户觉得指标都差不多，但却忽略了另外二个较为重要的指标：“最小检测浓度和光程”，这二个指标有什么作用呢？它们代表了什么含义？ 这里来解释一下： 最小检测浓度是考验仪器的灵敏度。最小检测浓度数值大，仪器的灵敏度就小，不能反应真正的噪音和漂移水平。例如：有些仪器的最小检测浓度小于1&time ...

1、认真阅读色谱柱使用说明书； 2、使用填充良好的色谱柱； 3、尽量减少压力波动，避免机械及热冲击； 4、使用保护柱及在线过滤器； 5、经常以强溶剂冲洗色谱柱； 6、充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与强保留成分； 7、用稳定的固定相（C18最稳定）； 8、在中等pH值操作时（6～8）， 用有机缓冲溶液； 9、色谱柱使用温度最好小于40℃； 10、硅胶基质的的色谱柱，应保持流动相的pH值范围 ...

一、保留值与分离度重现性不好原因分析 二、造成色谱峰（ 不对称）拖尾的原因1．色谱柱本身填装问题筛板堵塞或填料塌陷；2．柱头有污染；3．样品超载；4．样品溶剂不合适；5．柱外效应；6．化学或二次保留（硅羟基）效应；7． 缓冲容量不足或不合适；8． 重金属污染。 三、如何解决峰形拖尾的问题A. 与化学有关的拖尾问题1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用于碱性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知 ...

色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是最佳条件），只有这样，测得的结果才有可比性。 1、样品的前处理： 最好使用流动相溶解样品。 　　b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 ...

（一）保留时间变化 1.柱温变化 柱恒温，必要时需配置恒温箱； 2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱； 3.缓冲液容量不够 用>25mmol/L的缓冲液； 4.柱污染 每天冲洗柱； 5.柱内条件变化 稳定进样条件，调节流动相； 6.柱快达到寿命 采用保护柱。 （二）保留时间缩短 1.流速增加 检查泵，重新设定流速； 2.样品超载 降低样品量； 3.键合相 ...

1、流动相的抽作要求： 高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤；　　流动相脱气至关重要（可采用抽滤，超声波脱气等方法）。 2、吸滤头： 特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；清洗不成功则需要更换。 3、单向阀： 如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时 ...