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细胞色素b5的测定

细胞色素b5存于高等动物内质网膜的一种细胞色素。可从兔肝微粒体中提纯。因为与膜结合,用蛋白酶或表面活性剂处理可以使其溶解。还原型和氧化型的最大吸收光谱分别为555、526、423和414毫微米,分子量为12,500,氧化还原电位+0.02V。可由同样内质网膜内的还原酶通过NADH进行还原。还原型b5与被称为氰感受因子的酶一起,参与由氧将饱和酰基辅酶A转变成不饱和酰基辅酶A的脂肪酸不饱和化反应。 ...

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细胞色素P-450的光谱测定

细胞色素P450(cytochromeP450或CYP450,简称CYP450)为一类亚铁血红素—硫醇盐蛋白的超家族,它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢。 细胞中,细胞色素P450主要分布在内质网和线粒体内膜上,作为一种末端加氧酶,参与了生物体内的甾醇类激素合成等过程。近年来,对细胞色素P450的结构、功能特别是对其在药物代谢中的作用的研究有了 ...

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肝药酶Lowry比色法测定

Lowry比色法是蛋白质测定最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。Folin— ...

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实验动物自然衰老模型

哺乳动物的生命过程与人类十分相似。随着增龄,动物机体的组织器官出现退行性变化而表现出老化现象。如免疫系统是体内保卫自身的第一道屏障,随增龄胸腺退化萎缩、T细胞功能低下、自身抗体增加、对外来抗原的刺激应答能力减弱。老年期的免疫变化增加了某些老年病的发生。在神经系统脑内神经递质、受体以及某些代谢酶发生增龄性变化,表现为记忆能力下降、感觉迟钝、注意力降低;在呼吸系统方面,老年动物肺泡简质细胞弹性蛋白/胶 ...

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获得高质量土壤RNA的10个建议

早期的文章介绍了如何提取土壤DNA。大篇幅详细讲解了影响DNA得率和纯度的研磨均质、化学试剂(重点是裂解缓冲液)等问题。做DNA远没有做RNA压力大。不用太担心降解,得率还挺高。RNA就不一样,提取土壤RNA是环境分子生物学研究最难的研究方法之一。RNA提取本身就是件艰巨的任务,提取土壤的RNA挑战更大。最大的困难之一是土壤RNA得率。从土壤中获得RNA远比DNA少,前者 ...

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镉--血红素法测定组织水平金属硫蛋白

金属硫蛋日(metallothionein,MT)是富含金属及硫的可诱导性蛋白,它可被某些金属( Bi,Zn,Cu等)、激素(糖皮质激素)、细胞毒药物(顺铂及烷化剂)及其他与物理化学刺激相关的病理生理状况所诱导。MT广泛存在于哺乳娄动物除结缔组织外的几乎所有组织中,肝、肾、胰、肠中最为丰富,从已有的研究中发现:MT增加可介导肿瘤细胞对烷化剂及DDP产生耐药性。耐DDP的细胞MT含量增加且MT mR ...

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电子自旋共振法测定膜流动性

膜的流动性是生物膜结构的基本特征之一,主要指膜脂肪酸链部分及膜蛋白的运动状态。膜脂类分子在相变温度以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转及异化运动等方式。膜蛋白的运动方式大体分为侧向及旋转运动,主要受脂质双分子层的影响。脂肪酸不饱和键含量和链的长度明显影响着膜脂流动性,不饱和键的存在会降低膜脂分子间排列的有序性,从而增加膜的流动性,短链能减低脂肪酸链尾部相互作用,在相变温度下, ...

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荧光探针标记法测定细胞膜流动性

膜的流动性是生物膜结构的基本特征之一,主要指膜脂肪酸链部分及膜蛋白的运动状态。膜脂类分子在相变温度以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转及异化运动等方式。膜蛋白的运动方式大体分为侧向及旋转运动,主要受脂质双分子层的影响。脂肪酸不饱和键含量和链的长度明显影响着膜脂流动性,不饱和键的存在会降低膜脂分子间排列的有序性,从而增加膜的流动性,短链能减低脂肪酸链尾部相互作用,在相变温度下, ...

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含多个磷酸化位点的多肽的合成

生命活动与蛋白质的动态变化密切相关 很多情况下某些蛋白质是通过各种翻译后修饰来完成或改变其功能。在数量众多的蛋白质翻译后修饰中,蛋白质磷酸化修饰无疑是最重要的一类,它是指通过蛋白激酶(Protein kinase,PK)介导的酶促反应把磷酸基团从一个化合物转移到另一个化合物上的过程(Figure 1所示),是生物体内存在的一种普遍的调节方式。现今发现的所有人类蛋白质中超过30%可被磷酸化修饰,这 ...

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对乙酰氨基酚片溶出度测定

一、试验目的 1.掌握片剂溶出度的测定方法 2.能正确使用溶出度测定仪 二、实验指导 片剂等固体制剂服用后,在胃肠道中要先经过崩解和溶出两个过程,然后才能透过生物膜吸收。对于许多药物来说,其吸收量通常与该药物从剂型中溶出的量成正比。对难溶性药物而言,溶出是其主要过程,故崩解时限往往不能作为判断难溶性药物制剂吸收程度的指标。溶解度小于0.1~1.0(g/L)的药物,体内吸收常受其溶出 ...

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组织芯片制备的技术路线和基本制作过程

组织芯片制备的技术路线和基本制作过程: 通过组织芯片制作机细针打孔的方法,从众多的组织蜡块(称为供体蜡块,donor)中采集到数十至上百的圆柱形小组织(组织芯,tissue core),并将其整齐排列另一空白蜡块(称为受体蜡块,recipient)中,而制成组织芯片蜡块。然后对组织芯片蜡块进行切片,再将切片转移到载玻片上制成组织芯片。 1.芯片微陈列设计:在构建组织芯片之前,应该预 ...

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玻璃奶制作方法

玻璃奶制作方法如下: 1、玻璃粉购买,文献都说325目,但是买不到,也没有条件自己磨,卖400目的也可以,因为需要的玻璃粉精细度远低于400目; 2、50克玻璃粉溶解到200ml蒸馏水;磁力搅拌器混匀一小时; 3、沉降90min;取上清(工业用玻璃粉表面可能有杂质漂浮,倒掉不要),离心3000rpm 3min(经实验该离心力足够),一般分到3~4管 50 ...

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经口给药法

经口给药有口服和灌胃两种方法,口服法一般将药物掺入饲料或溶于水中,由动物自由摄取,但为了保证药物的剂量准确性,应使用灌胃法。可供选择的动物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猫、狗等动物。 灌胃法 (1)小鼠灌胃法:将小鼠放在粗糙面上,用左手手掌及小指无名指夹住尾部,再以拇指及示指抓住两耳和头颈部的皮肤,使口腔和食管成一直线,腹部面朝上,右手持灌胃器(1~ 2ml的注射器和16号兽用针头,把针 ...

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ELISA的概念、原理、操作步骤

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 (一) 原理 ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很 ...

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HP D300:多药物相互作用下的定量药效学研究的新工具

历经4年多的研发及与先导用户的互动,Tecan与惠普公司联合推出了皮升级药效学矩阵生成系统HP D300 Digital Dispenser。HP D300由惠普公司制造生产,Tecan集团负责全球包括中国及东南亚在内的销售及服务,该产品2012年3月在美国正式推出,5月已在中国上市。2012年2月在美国加利福尼亚州圣地亚哥举行的第一届SLAS年会暨展览会上,该产品引人关注,荣获2012最佳新产 ...

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HBV相关的肝细胞癌外显子组研究

肝癌(Hepatocellular Carcinoma HCC)是一种严重威胁人们健康的恶性肿瘤,每年约有70万患者死于肝癌。在中国,肝癌每年发病人数超过25万人,其发病主要与乙肝病毒感染、酒精肝、食物受黄曲霉毒素污染等原因有关。肝癌的高致死率主要是由于其具有很强的侵润和转移能力,特别是常常侵入肝内血管,形成肝内转移,病理学特征是门静脉癌栓(portal vein tumor thrombosi ...

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细胞自噬的研究方法

细胞经诱导或抑制后,需对自噬过程进行观察和检测,常用的策略和技术包括观察自噬体的形成、利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成等。

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