使用油脂介孔膜蛋白结晶的一个详细的协议描述。这种方法有不同的被称为油脂立方相, 或在中观方法。该方法已被证明是相当通用的,因为它已被用于解决X射线晶体结构的原核和真核细胞的蛋白质,蛋白质是单体,同源异多聚体,生色含和生色,和alpha螺旋和β-管蛋白。最近取得的成功观的结晶,是人类设计的β2-肾上腺素和腺苷A2A G蛋白偶联受体。协议提出的重组膜蛋白的monoolein为基础 ...
前言 免疫印迹法是一种对生物样本中的特异性蛋白进行检测分析的技术,是检测蛋白特异性、表达与分布的最常用方法。但是传统操作难以满足实验室高通量,规范化的检测要求。因此为适应临床诊断的需求,新的印迹法技术被不断的探索和发展。欧蒙作为全球血清学诊断领域的领导者,经过多年的探索和完善,提出了一套完整的免疫印迹法检测自动化解决方案,这大大提高了免疫印迹法检测的效率,实现了免疫印迹法检测结果的标准化判读和评 ...
间接免疫荧光法是自身抗体等免疫学指标检测的重要手段,是抗核抗体(ANA)检测的“金标准”。为了更好的发挥“金标准”的作用,为临床诊断提供有力的支持,保证间接免疫荧光法检测的准确性和时效性,就显得尤为重要。 为保证检测结果的准确性,荧光结果的判读是至关重要的一个环节。荧光检测结果的获取,需要通过人工观察荧光显微镜。目前常见的荧光核 ...
1. 材料与方法 1.1 实验动物及试剂 出生7-9d大鼠幼仔、手术器械、DMEM培养基和胎牛血清FBS、0.125%胰蛋白酶、PBS等包被:Poly-L-Lysine多聚赖氨酸,储存液浓度为4mg/ml,超纯水稀释(1:300)。使用时浓度为13.3ug/ml。24孔板每孔加50ul室温孵育1h后吸去,超纯水清洗后吹干。 DMEM培养基10ml,添加剂:谷氨酰胺(146.15)2 ...
肝癌是全球六大常见癌症和三大致死性癌症之一。 肝癌的恶性转移主要由几个原因介导的,特别是IGF及其配体、受体、底物、和配体结合蛋白。 IGF信号通路通过与细胞表面上特异性受体结合的形式在调节细胞增殖、分化、凋亡等方面起着非常重要的生理作用。 IGF系统包括配体(IGF-1IGF-2和胰岛素),受体(IGF-2R胰岛素受体IRIGF01R/IR杂交受体HR)和6个高亲和 ...
从1949年美国College of American Pathologists(简称CAP)首先开始研究临床实验室室内质量控制(简称质控)问题,美国学者Levery和Jenning于1950年发表第一篇关于使用质控图的实验室室内质控,临床检验实验室的室内质控工作正式拉序幕。 到70年代,实验室质量控制进入一个新的阶段--全面质量管理,推行GoodLaboratory Parcti ...
如果是新的数据,你只要双击图表,把它输入到图表的数据中,就可以拟和曲线。根据曲线方程式,计算出浓度。 方法: 1、拟和曲线: 输入第一行: 浓度值, 如0 10 50 100 40 ...
污泥是污水处理的副产物,含有多种菌胶体、有机物、无机物的一种复合产物,未经处理的污泥成分复杂,除含有灰分外,还含有大量的有机质、难降解的有机物、多种微量元素、病原微生物、寄生卵、重金属及盐类等成分。污水和污泥体系复杂、干扰组分多,给分析带来了一定的困难。因此就要求必须去除杂质和其它成分的方法要合理有效,另外由于目标化合物含量低(通常处于痕量或超痕量级别),要保证分析方法的灵敏外,还要求去杂质方法 ...
真空冷冻干燥技术简称冻干技术,是生物及其它领域用来提取纯化和保存样品的常见应用方法之一,本文将列举一些常见物质的共晶点温度及其冻干方式,与大家共同探讨。 众所周知,在冻干过程中最关键的条件就是控制样品温度保持在共晶点温度以下10-15℃,从而保证样品不熔化,维持微孔结构和理化性质保持完好不变。现将一些常见样品的共晶点温度数据和冻干方式整理出来,供大家参考。 表一 常见 ...
科学研究应建立于许多实验结果的重复之上除了少数新发现外单个实验结果很难对科学的发展作出极为显著的贡献。所以为了阐明某一主题在许多科学领域有众多研究者在对不同的实验对象或对同一对象在不同的实验环境中进行实验在医学界如胎教对婴儿智力的影响吸烟与肺癌的相关程度等都曾有大量的临床或调查实验对这些大众所关心的问题进行统计分析研究但结果不尽相同。面对如此多结果不一的独立研究作为决策者该相信哪一个分析结果呢? ...
甲基化是目前的研究热点,就我所做的一点工作并其中一点心得,与大家分享。希望能够对大家有所帮助。 第一部分 基因组DNA的提取。 这一步没有悬念,完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒,如果实验室条件成熟,自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定,只要在操作中不要使用暴力,提出的基因组DNA应该是完整的。 此步重点在于DNA的纯度,即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提 ...
2012年10月8日,瑞典诺贝尔奖评审团宣布,日本京都大学山中伸弥(Shinya Yamanaka)与英国发育生物学家约翰·戈登(John Gurdon)因在细胞核重新编程研究领域的杰出贡献,从而获得2012年诺贝尔生理学或医学奖。以下是2012诺贝尔医学奖得主山中伸弥实验室介绍,欢迎查看。
2012年10月8日,瑞典诺贝尔奖评审团宣布,日本京都大学山中伸弥(Shinya Yamanaka)与英国发育生物学家约翰·戈登(John Gurdon)因在细胞核重新编程研究领域的杰出贡献,从而获得2012年诺贝尔生理学或医学奖。以下是诺贝尔奖项揭晓现场视频,欢迎欣赏。
肾小球硬化的主要发病机制之一是细胞外基质(ECM)的异常沉积。转化生长因子p1(TGF-B1)在ECM沉积中起作用,并与MAPK信号通路有密切关系。醛糖还原酶(AR)是多元醇代谢通路中的限速酶,研究证实AR基因为大鼠肾小球肾炎及肾脏硬化过程中系膜细胞(MsC)的TGF-6l反应性基因之一。以蛋白质印迹检测正常MsC、AR转基因MsC、应用醛糖还原酶抑制剂索比尼尔(sorbinil)和哇泊司他(z ...
转化生长因子(TGF)一13/Smads信号传导通路是由TGF—B超家族、TGF—B受体,Smad蛋白家族及其核内转录调节因子组成的肿瘤抑制通路。通路中任一元件的异常都可以引起TGF.13/Smads信号传导紊乱,从而导致肿瘤的发生¨ 。研究表明,半数以上的胰腺癌都有TGF一13/Smads信号传导异常,其发生机制主要包括Smad基因家族突变(主要为Smad4)和 ...
Wnt /β-catenin信号转导通路是一条在生物进化中极为保守的通路。在正常的体细胞中,β-catenin只是作为一种细胞骨架蛋白在胞膜处与E-cadherin形成复合体对维持同型细胞的黏附、防止细胞的移动发挥作用。只有当细胞外Wnt信号分子与细胞膜上特异性受体Frizzled蛋白结合激活胞内的d ishevelled(散乱的)蛋白导致GSK3B失活,使α-ca ...
一、实验目的 1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。 2.了解溶血现象及其发生机制。 二、实验原理 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜,可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的,水是生物界最普遍的溶剂,水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散,这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低 ...
摘要 Groundbreaking work demonstrated that ectopic expression of four transcription factors Oct4 Klf4 Sox2 and c-Myc could reprogram murine somatic cells to induced pluripotent stem cells (iPSCs ...
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点,但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达,必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制,分离到子代细胞,从而使基因高效持续表达,是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus,EBV)复制子(EBV rep ...
逆转录病毒载体属RNA病毒,但可在受染细胞内反转录产生DNA互补链,此DNA单链可作为模板合成第二条DNA链,第二条DNA链可掺入细胞基因组DNA中。此病毒可利用宿主细胞的酶自行转录与复制,RNA可合成蛋白,再包装病毒,RNA从胞内释放,成为感染性病毒,该载体可经不同方式改变。介导过程可使病毒单拷贝基因组稳定地进入细胞。 首先,逆转录病毒的繁殖必须要有适当的包装细胞系,以利于产生高 ...