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当抗原与相应抗体形成一个接触面时，如二者比例适当，接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。 一、材料 （1）免疫血清：免疫兔抗人血清。 （2）抗原：人血清。 （3）小沉淀管、毛细吸管、橡皮头、生理盐水。 二、方法 （1）取小沉淀管2只，以毛细吸管吸取抗人血清约0.2ml，加入第一管，加时注意不能有气泡。 （2）以毛细吸管吸取生理盐水0.2 ml 加入第二管。 ...

一、IP前的准备工作： coIP：分为内源性蛋白的相互作用和非内源性蛋白相互作用（后者包括外源蛋白之间以及外源拖内源蛋白）。 非内源性蛋白的相互作用，主要是通过过表达来实现，通常为简化实验、提高IP效率会让外源蛋白带上标签（tagged；这也是没有相应的可用于IP的内源蛋白抗体之前唯一可行的方案），因此就tag的使用而言存在很多小技巧。 1. His-tagged主要 ...

在从事细胞信号转导的研究过程中我们常常需要探寻新的通路。在纵横交错，纷繁复杂的cross-talk中如何筛选可能的路径是signal transduction领域永恒的话题，而免疫共沉淀技术则是常用而简便的方法之一。 1. 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）技术是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。它能确定两种蛋 ...

生物大分子的结构与功能的研究是了解分子水平的先象的基础。没有对生物大分子的结构与功能的认识，就没有分子生物学。正如没有DNA双螺旋结构的发现，就没有遗传传达传递的中心法则，也就没有今天的分子生物学。结构分子以由第一分子进入对复和物乃至多亚基，多分子复和体结构研究。 同时，过去难以研究的分子水平上的生命运动情况也随着研究的深入和技术手段的发展而逐渐由难点变为热点。蛋白质晶体学研究已从生物大分子静 ...

酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。 一、利用酵母双杂交 ...

基因组（genome）包含的遗传信息经转录产生mRNA，一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组（transcriptome）。很显然，不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质，一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的蛋白质称为蛋白质组（proteome）。同理，不同细胞在不同生理或病理状态下所表达的蛋白质的种类 ...

研究蛋白-蛋白相互作用是理解生命活动的基础。蛋白质—蛋白质互作网络是生物信息调控的主要实现方式，是决定细胞命运的关键因素。检测蛋白质间相互作用的实验方法有哪些？这些检测方法各有什么优缺点？总结如下。 一、生化方法 共纯化、共沉淀，在不同基质上进行色谱层析（需要补充）蛋白质亲和色谱 基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上（如Sepharose），当细胞抽提液经过改基质时， ...

蛋白质-蛋白质相互作用图谱能对细胞功能和蛋白组机制提供有用信息。除了在线预测蛋白相互作用外，通过比较具有相对专一性语义关系的的两基因语义注释（Gene Ontology terms GO）的相似性，可以得到重建酵母蛋白互作网络图谱的新方法。为了验证这种方法的有效性，利用高置信蛋白互作标准数据校正确认。 由此种方法预测重建的蛋白互作网络含40753种互作关系，2259 ...

蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。把原来spaces空间上的一篇蛋白质与蛋白质间相互作用研究方法转来，算是实验技巧分类目录的首篇。 一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因 ...

一、免疫共沉淀和亲和层析共分离 免疫共沉淀是证明蛋白质-蛋白质相互作用的最直接最经典和最有效的方法，如蛋白A能与B相互作用结合成异源二聚体，无论用抗A或抗B的抗体或与A或 B的亲和物偶联的agarose小珠都能把A和B沉淀下来。因此广泛用于蛋白质相互作用研究。 常用的小珠： GST-Agarose（不需要抗体） ProteinA-Agarose(用时需加抗体) 基本方法： 1.表达蛋白质A 2 ...

一、Osprey 作者： Bobby-Joe Breitkreutz Chris Stark Mike Tyers 网址：http://biodata.mshri.on.ca/osprey/servlet/Index 编程语言：Java 操作平台：Window2000/xp/9x; LinuxUnix; 介绍：a network visualization system. A so ...

PCR基础 聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到。反应包括几个成分（表1）。 模板可以为纯化的基因组或质粒DNA；由RNA转化得到的cDNA；或未经纯化 ...

PCR技术通常是定性检测特定 RNA与DNA序列的常规方法。而现在，实时定量 PCR技术已经越来越成熟，在病原体检测领域中有突出的优势，并已在医疗诊断领域中崭露头角。实时定量PCR技术主要是利用标记有荧光染料的特异性探针，在PCR过程中与目标序列发生特异性结合并在Taq酶作用下发生水解，而使检测荧光的强度发生变化。这些变化将用于监测反应进程并估算模板量。 由于荧光探针的使用，使核酸 ...

基因组DNA提取是最基本的分子生物学实验技术，是做各种核酸实验的基础。不同生物的基因组DNA提取方法也会有所不同。

pubmed基本检索 pubmed基本检索 ...

ELISA实验步骤 ELISA实验步骤 ...

Western blot之歌 Western blot之歌 本视频来自 ...

做了快7年的分子克隆，从加样加不好，到现在轻松PCR，我想分子生物学这块还是有很多经验可以分享一下的。或许很多人会说分子克隆过程中出现问题最多的大概就是连接了，大家抱怨的也最多，我也陷入在个步骤上很久。经过长时间的摸索我在连接这个问题上有一些体会，我认为连接的问题多集中在连接的体系、DNA的用量、vector和insert的比例、连接酶等。但是我认为，连接不成功，问题并不一定出在连接这步上。有很多 ...

材料 琼脂糖凝胶介质镍亲和柱 紫外检测仪 蛋白电泳装置及夹子、玻璃板、灌胶支架、缓冲液槽等附件 5 ml 注射器 0.45 μm 滤器 超声破碎仪 试剂 1. 结合缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，10 mM 咪唑，pH=8.0 2. 洗脱缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，不同梯度浓度的咪唑，pH ...

本法可使抗体或其它蛋白质的ε-氨基通过手臂与酰化的生物素共价结合。其后，生物素化的分子可应用酶标-亲和素或荧光染料-链霉亲和素复合物来检测。小分子的水溶性生物素对细菌蛋白链霉亲和素具有高度亲和力是本法的设计基础。 NHSB：N-羟基琥珀酰亚胺生物素（有商品供应） 0.1 mol/L 碳酸氢钠缓冲液，pH 8.0 双蒸水（注意去除游离氨基），用以配制碳酸氢钠缓冲液或硼 ...