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细胞器的分离细胞由细胞膜、细胞核和细胞质组成，细胞质中含有若干细胞器和细胞骨架等，这些也称作亚细胞组分。对于细胞的结构和功能的研究，是细胞生物学的基本课题，其重要的研究手段之一是分离纯的亚细胞组分，观察它们的结构或进行生化分析。分离亚细胞组分的方法主要有差速离心和密度梯度离心。差速离心（differential centrifugation）在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小 ...

血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。 涂片法制片是生物显微制片的基本方法之一。 步骤：可分5个步骤进行消毒→取血→推片→染色→观察消毒与取血消毒先按摩取血部位，使血流通畅；再用酒精消毒采血针和取血部位（如指尖）。取血待酒精干后，刺破皮肤，使血自然流出，勿挤。取干净载片，让血滴在离载片一端中4～ ...

MMBMINICHROMOSOME-MICROTUBULE BINDING ASSAYDetermine the OD600 and correlate the cell density from the chart. Set up four 100mL YPD cultures at the following densities: 0.7x105 1x105 and 3.0x105 cells ...

王俊1 张怡2 赵春林1 1龙脉得生物技术有限公司 2中国协和医学院 北京清华大学 学研大厦A304. 邮编:100084导言干细胞在肿瘤治疗、组织工程和细胞治疗等方面拥有巨大的潜力。如果在活体动物体内，在各种组织和器官都保持完整的情况下能够观察干细胞的行为和生物学特性，则会大力促进基于干细胞的各种疾病治疗方法的研究工作。目前已对多种干细胞进行了大量的研究，动物模型研究方法也很多，但典型的方法还是 ...

LAK(Lymphokine activated killer cell)细胞是用细胞因子（如IL-2、IL-12 等）活化的杀伤细胞。即采用自体或同种异体外周血淋巴细胞，在体外经细胞因子活化3~5 天，增强其广谱抗肿瘤作用的功能，并使数量大幅扩增，成为LAK 细胞，可用于肿瘤的治疗。基本原理应用人重组IL-2（hr12 等）于体外活化和扩增外周血淋巴细胞，使其成为经细胞因子活化的杀伤（LAK 细 ...

Prechill glycerol MgCl2 and GTP on ice. Rapidly thaw frozen tubulin then immediately place on ice. Unpolymerized tubulin is labile!200 µL aliquot of tubulin (cycled)--in BRB80 stored in -70℃100 µL gly ...

一、实验目的1. 观察巨噬细胞的吞噬活动。2. 掌握小鼠腹腔注射给药和脱颈椎处死方法。二、实验原理高等动物具有大小两类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，专司吞噬作用，为非持异免疫功能的重要组成部分。小鼠腹腔腹腔注射 淀粉肉汤液，可诱导巨噬细胞。三、实验用品1．器材显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、吸管、吸水纸2．试剂生理盐水、Alsever溶液、4％台盼蓝染液3．材料小白鼠、 ...

肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyteTIL）是从手术切除的肿瘤组织或转移的淋巴结中分离的淋巴细胞，经细胞因子（如IL－2）诱导活化，经大量增殖后回输给原病人。TIL 细胞是一种较LAK 细胞杀瘤效果好、特异性高，而扩增时对IL－2 的作用浓度要求更低的肿瘤杀伤细胞。试剂和材料● 手术切除的肿瘤组织● 淋巴细胞分离液（100％及用1640 配制75％浓度）● ...

Thaw tubulin Adjust solution to a final buffer concentration equivalent of glycerol PB Incubate at 37oC for 30 min. Layer tubulin onto cushions of BRB80 containing 60% (v/v) glycerol the cushions shou ...

目的要求 1．熟悉酸性磷酸酶显示方法的原理及操作步骤 2．观察酸性磷酸酶在细胞中的分布基本原理酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬细胞，定位于溶酶体内。在溶酶体膜稳定完整时，底物不易渗入，ACP活力微弱或无活性，经固定，在合适pH条件下，膜本身变为不稳定，逐渐改变其渗透性，底物可以渗入，酶活力被显示。ACP在酸性条件下（pH4.7）可使作用液中的底物β-甘油磷酸钠 ...

细胞克隆，是将一个单细胞从细胞群中分离出来单独培养，使之重新繁衍成一个新的单一细胞群的培养技术。未经克隆化的细胞具有异质性，经过克隆得到的是均一细胞集团。这里仅介绍T细胞与NK 细胞的克隆方法。基本原理用限度稀释克隆形成法制备T 细胞克隆时，并非依赖细胞 的特性，而是将T 细胞在细胞培养板上稀释到统计学的浓度，即从理论值上达到每孔1 个细胞，其中加入IL－2 和PHA 可增强细胞的生长，而加入的同 ...

目的要求1.掌握血涂片的制备方法；2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态；3.掌握显微测微尺的使用方法。实验原理涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。实验用品1.器材:医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片 、双凹片（推片） 。2.试剂:Wright’s染液：Wright’s色素粉末 ...

文喻玲，赵庆欢，于 洋，陈元鼎［摘要］ 纯化是研究病毒理化特性、生物学和免疫学特性的重要步骤和要求。在纯化病毒的方法中，氯化铯（CsCl）密度梯度离心法是较为常用的方法之一，方法简便易行，获得的病毒样品较纯。本文报道一种轮状病毒(RV)的CsCl密度梯度离心纯化方法，在离心前用聚乙二醇（PEG 6000）浓缩得到的病毒增殖液中加入56％CsCl，使其成为均匀混合液，经水平转头密度梯度离心后，可以将 ...

目的要求通过PAS反应，了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布。基本原理糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成，在肝和肌肉最丰富。过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二个游离醛基（—CHO），游离醛基与Schiff ‘s试剂反应生成紫红色产物，颜色深浅与多糖含量成正比。由于单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽提掉，故一般组织标本上所能显示的糖类主要 ...

一、实验目的1、进—步熟悉荧光显微镜的使用方法。2、初步了解几种常用的荧光染色方法。二、实验用品荧光显微镜、水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、消毒牙签三、实验原理荧光法较一般光学方法具有灵敏度高、特异性强、方法简便等优点，因此近年来荧光组织化学特别是免疫荧光技术有了很大的发展。利用荧光技术可研究细胞内化学成分的分布与定位，研究细胞与组织中物质的吸收与转运，进行病理鉴别以及细胞免疫等方面的研究。 当用一 ...

一、实验目的：1、掌屋凋亡细胞的形态特征2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。在形态上 ...

① 学习坐骨神经干标本制备的一些基本操作技术。 ② 观察蛙类坐骨神经干动作电位的基本波形。 ③ 学习掌握神经动作电位传导速度的测定和计算方法。 ④ 观察神经组织兴奋性的周期性变化。 ⑤ 观察药物对动作电位的影响。 神经纤维的动作电位是神经兴奋的客观标志；神经干由很多兴奋性不同的神经纤维组成。神经干动作电位是由许多这种兴奋性不同的单根神经纤维的动作电位综合成的复合性电位变化。因 ...

基本原理NK 细胞克隆来源于NK 细胞，该细胞的分离方法参见第一节之四。这些NK 细胞与经γ射线照射的饲养细胞苓而获得的NK 细胞克隆。试剂和材料● 植物血凝素（PHA）母液为100μg/ml● 重组IL－2（rIL－2）母液为105u/ml，分装小瓶（0．5ml/瓶），置－20℃长期保存，或置4℃下短期存放。应避免反复冻融，IL－2 不能用滤器过滤除菌处理。● 培养基1.接种培 ...

一、实验目的 1. 初步掌握用差速离心法分离大鼠肝细胞线粒体的方法。 2. 学习并掌握高速离心机和匀浆器的使用方法。 二、实验原理 线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。 制备线粒体时，可将组织匀浆液悬浮 ...

1、复苏细胞 1）液氮中取出所要的细胞，37℃水浴锅中快摇，勿让水入盖，同时将培养液放入37℃水浴锅中温育； 2）将细胞离心，同时进入超净台，无菌操作，将培养液瓶用卫生纸擦干，除菌后放入超净台，将盖子打开，瓶子放在架子上，瓶口朝火焰，将吹打吸管灭菌后吸部分培养液进入培养皿； 3）离心完毕，将细胞冻存液倾倒掉，吸入约1ml培养液到冻存管中，反复吹打，悬起细胞，吸入皿中，吹打，标好； 4) 显微镜下观 ...