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        大肠杆菌细胞超声波破碎

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        大肠杆菌的基因工程

        一、原理:微生物 细胞在超声波的作用下,细胞结构受到破坏,而使细胞破碎。

        二、材料与试剂:超声波破碎仪、显微镜、烧杯、细胞破碎缓冲液(10mmol/L,PH7.4Tris-HCL缓冲液中含5mmol/L的MgCL2)、细胞悬浮液(取50-100mg)大肠杆菌湿细胞悬浮在1ml细胞破碎缓冲液中)、培养基(牛肉膏0.5%、蛋白胨1%,NaCL0.5%制成肉汤液体培养基。取上述肉汤培养基加进2%琼脂 ,制成固体培养基,用作菌种活化与保藏)。

        三、操作方法

        1、细胞培养 和收集:将活化菌种接入肉汤培养基中,于37℃振荡培养。当到达对数生长期后(约6h),用离心机收集细胞,8000r/min离心5min,或3000r/min离心20min。

        2、在显微镜下观察细菌的形态特征。

        3、细胞破碎:取湿细胞50-100mg悬浮于1ml细胞破碎缓冲液中。用20kHz频率,150W的功率,在冰浴中进行超声波破碎,每破碎60s,间隔60s,反复破碎三次。

        4、在显微镜下观察破碎后的细胞形态。

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