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        培养细胞活力测定

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        培养细胞活力测定是肿瘤体外研究中应用最广的技术手段之一。

        任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和活细胞组成,从形态上区别死、活细胞是困难的。

        方法:四唑盐(MTT)比色法

        四唑盐(MTT)商品名为噻唑蓝

        四唑盐比色法的原理:活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物(formazan),并沉淀在细胞中,而死细胞没有这种功能。二甲亚砜(DMSO)能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物,溶液颜色深浅与所含的formazan(甲月替)量成正比。再用酶标仪测定OD值。

        MTT法简单快速、准确,广泛应用于新药筛选、细胞毒牲试验、肿瘤放射敏感性实验等。

        操作步骤

        (1)100μL单细胞悬液接种于96孔板(5×104)。37℃、5%CO2培养箱中培养一段时间(根据实验目的决定培养时间)

        (2)加入2mg/ml的MTT液(50μL/孔);继续培养3小时。

        (3)吸出孔内培养液后,加入DMSO液(150μL/孔),将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟,使结晶物溶解。

        (4)酶标仪检测各孔OD值(检测波长570纳米)。记录结果,绘制。

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