白细胞的纯化
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1.低渗处理法
[试剂及配制]
(1)蒸馏水
(2)1.8%氯化钠溶液
[操作方法]
(1)向白细胞悬液中加入1ml蒸馏水,轻轻地震荡20s,使混杂的红细胞裂解;
(2)加等量1.8%氯化钠溶液,调至等渗;
(3)再加Hank’s溶液混匀,离心沉淀,反复两次;
(4)取末次沉降细胞配成所需浓度的白细胞悬液。
2.氯化铵处理法
[试剂及配制]
(1)Gey溶液母液A:称取35.0gNaCl,1.85gKCl,1.5gNa2HPO4.H2O,0.119gKH2PO4,5.0g葡萄糖,和50mg酚红,并将上列各物溶于1000ml蒸馏水中,10磅高压蒸汽灭菌15min。如果用NH4Cl35.0g代替NaCl,补优质明胶5g,即为溶血用的Gey溶液的母液A。
(2)Gey溶液母液B:称取0.42gMgCI2·6H2O,0.14gMgSO2·7H2O,O.34gCaCl2,并将上列各物溶于100ml蒸馏水中,10磅高压蒸汽灭菌15min。
(3)NaHCO3溶液:称取2.25gNaHCO3,溶于100ml蒸馏水中,10磅高压蒸汽灭菌15min。
(4)Gey应用液:取母液A20ml,蒸馏水70ml及母液B5ml,混合后加NaHCO3溶液5ml即成。
[操作方法]
(1)在白细胞悬液中加入含氯化铵的Gey应用液1ml,轻摇2min,使红细胞裂解;
(2)加入等量的不含氯化铵的Gey应用液,离心,取沉淀细胞配成白细胞悬液。
[注意事项]
用上述诸法所得细胞悬液,含有较多粒细胞、单核细胞和血小板,而淋巴细胞纯度约为60~67%。