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        从免疫血清纯化抗体

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        930

        从免疫血清纯化抗体
        1. 剪取一小条0.45 μm 的硝酸纤维膜,置于1.5ml eppendorf 管中,浸没于1 ml
        1 mg/ml 的抗原溶液中,5 min。
        2. 取出膜,置于滤纸上干燥。
        3. 将膜放置于装有1 ml Buffer A 的eppendorf 管,轻轻震荡混匀30 min。
        4. 移去Buffer A,用新鲜的Buffer A 洗一次,将膜浸没于0.8-1 ml 相应的抗血
        清中,1-2 h, 于混匀器上轻轻震荡混匀。
        5. 移去血清,用PBS 洗膜,4 次,每次5 min。
        6. 洗脱抗体
        新配置100 mM 甘氨酸(pH 2.5)抗体洗脱液,将膜置于洗液中,手轻摇
        混匀2 min,迅速将洗液转移至装有100 μl 1 M Tris(pH 8.0)中和,使抗体
        复性。第1 次洗脱用400 μl 抗体洗脱液,第2,3 次用200 μl。
        7. 往洗脱下来的液体中加入100 μl Buffer A 以稳定抗体,并分装成30 μl 每管,
        于-20℃保存。
        注:所有步骤均在室温完成。
        Buffer A: 5% BSA, 10 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.2% NP-40, pH 7.4

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