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        细胞株HLA-undefined02检测方法

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        2243

        方法1、抗体测定:研究对象取200μl新鲜抗凝全血,每管100μl加入流式细胞仪检测管中,再加入2ml红细胞裂解液反应12min后离心,弃上清液,磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)洗细胞两次,其中反应管加入鼠抗人HLA-undefined02抗体××μl(达科为公司),4℃ 30min孵育后,PBS再次洗细胞,每管加入PE标记羊抗鼠免疫球蛋白2μl,4℃、30min孵育后,PBS洗涤,FACS固定液200μl加入每管,4℃保存用于流式细胞仪检测。

        方法2、特异性的PCR引物(北京戴诺生物技术有限公司,电话:010-67806708转204)进行PCR(PCR-SSP)应该也可以进行测定,比较简单些,以下为参考:
        引物:
        上游引物:5’-CCT CGT CCC CAG GCT CT-3’
        下游引物:5’-CCC CTG GTA CCC GT-3’
        产物长度:813bp
        扩增体系:10×buffer, 5ul
        DNA:5ul(500ng)
        DNTP:5ul(2nM)
        引物:4ul
        Taq:2ul
        ddH2O:29ul
        步骤:95℃(1min)-5℃(1min)-72℃(2min)×5-95℃(1min)-55℃(1min)-72℃(2min)×25

        (责任编辑:大汉昆仑王)
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