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        免疫电泳

        互联网

        1862

         

        实验五十八 免疫电泳

         

          一、目的要求

          学习免疫电泳的一般原理与方法。

          二、基本原理

          免疫电泳的基本原理是将电泳和琼脂免疫扩散结合起来应用,即先将蛋白质抗原在琼脂内进行电泳,使分离成不同的电泳区带,然后在一定距离的抗体槽内加入抗血清,使进行免疫扩散沉淀反应,这样,每一电泳区带又可能产生一个以上的沉淀线条。因而此法克服了单纯琼脂扩散方法中的沉淀线重叠成束,不易鉴别的缺点,大大提高了琼脂扩散试验的分析能力。

          三、器材

          某种可溶性抗原和相应抗体,例如鸡血清、鹅血清和鸡血清的免疫血清;

          1%离子琼脂, pH8.6离子强度0.075mol/L巴比妥缓冲液(配法见附录Ⅲ);

           电泳仪,电泳槽,打孔器,2mm直径的圆形薄壁金属管,开琼脂长槽用的手术小刀,毛细滴管或微量加样器,注射针头等。

          四、操作步骤

          1.取清洁无划痕的普通载玻片,放在水平位置。

          2.用刻度吸管吸取溶化并已冷至50—60℃的1%离子琼脂3.5—4ml左右,加在上述载玻片上,使均匀布满玻片,待凝固。

          3.用金属圆形管按图XIII-13打孔,用注射针头挑去琼脂。

         

          4.用毛细滴管或微量加样器在上孔加鸡血清,下孔加鹅血清。

          5.电泳 将琼脂板移至电泳槽上,电泳槽中放pH8.6离子强度0.075mol/L的巴比妥缓冲液,琼脂板的两端各用四层纱布与缓冲液搭桥。接通电源,电流为4—6mA/cm,电压为10—12V/cm。电泳时间为45分钟至1.5小时,亦可在抗原中加些溴酚蓝作为标志,当溴酚蓝泳动到距琼脂板末端1cm处,即关闭电源。

          6.取出琼脂板,用手术小刀按图XIII-13在中央挖一长槽,用注射针头挑去琼脂。

          7.在长槽中加入抗鸡血清的免疫血清,然后将琼脂板放入内有几层湿纱布的带盖搪瓷盘中,37℃下扩散24小时。

          五、实验报告

          1.结果

          绘图表示琼脂玻片上出现的沉淀线。

          2.思考题

          (1)如果所用抗原抗体是鸡血清、鹅血清和抗鸡血清的免疫血清,从所得结果看,鸡血清与鹅血清有无共同抗原?

          (2)免疫电泳与双向免疫扩散比较,哪个方法敏感?为什么?

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