实验10 气孔保卫细胞内钾离子变化的观察

 

实验10 气孔保卫细胞内钾离子变化的观察

 

原理

 

　　气孔开关的钾离子泵学说认为，当保卫细胞内有钾离子累积时，细胞内有渗透势降低，从而吸水膨胀，使气孔张开；当保卫细胞的钾离子外流时，气孔关闭。

　　用亚硝酸钴钠的组织化学染色法，在显微镜检查双子叶植物保卫细胞和单子植物副卫细胞中的钾离子，钾离子与亚硝酸钴钠形成黄色的亚硝酸钴钠钾沉淀，如再与硫化铵作用则形成CoS的黄黑色结晶。

 

仪器药品

 

　　显微镜 　　　50%乙醇溶液

　　载玻片、　　盖玻片 5%硫化铵─5%甘油固定液

　　镊子

　　15%亚硝酸钴钠[Na₃ Co(NO₂ )₆ ](新鲜配制，并用几滴冰醋酸酸化，每10ml加1滴)。

 

操作步骤

 

　　1．实验前先将玉米和蚕豆种子播于花盆中，当苗长30cm左右时，即可用作实验材料。在培养过程中，最好施少量钾肥，特别是冬季在温室内培养时，要防止缺钾，以免玉米保卫细胞内因缺钾而实验结果不明显。取两盆培养的植物，分别作光处理和暗处理，或者一盆植物先进行暗处理再照光。照光时用100W白炽灯，距离花盆30─40cm，照光1─2小时。

　　2．撕取表皮及染色：从处理的植株上剪下叶片，放入蒸馏水中轻轻清洗，然后用镊子撕取玉米和蚕豆叶片的下表皮，并将此表皮于蒸馏水中漂洗1分钟，转移至新配制的15%亚硝酸钴钠溶液中，染色15分钟。再将染好色的表皮样品取出，在水中漂洗一下，迅速转移至50%乙醇溶液中漂洗15分钟，漂洗时搅动几次，最好换一次乙醇溶液。此时形成亚硝钴钠钾的黄色沉淀物。

　　以上操作要求在3℃以下的条件中进行，试剂事先放在冰箱内冷却，或在冰浴中操作亦可。

　　3．固定样品：将制备好的样品，放在载玻片上，加1滴含有5%硫化铵梍5%甘油的固定液固定，盖上盖玻片，在显微镜下观察，黄黑色结晶即为亚硝酸钴钠钾的黄色沉淀在硫化铵作用下所形成的CoS。