大鼠葡萄糖依赖性促胰岛素激素EIA试剂盒使用说明

 

大鼠 葡萄糖依赖性促胰岛素激素 EIA 试剂盒使用说明

 

原理

本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。用抗大鼠 GIP 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 GIP 与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物 TMB ，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在 450nm 处测 OD 值， GIP 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 GIP 浓度。

试剂盒组成 （ 2-8℃ 保存）

酶标 板（ Coated Wells ）	96 孔	酶标抗体工作液（ Enzyme Conjugate ）	6ml
标准品（ Standards ）： 6 瓶	一套	20 ×浓缩洗涤液（ Wash Buffer ）	50ml
封板纸	一张	底物工作液（ TMB Solution ）	12ml
坐标纸	一张	终止液 （ Stop Solution ）	12ml

准备试剂与收集血样

1.          收集标本：血清、血浆（ EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8℃ 保存 48 小时；更长时间须冷冻（ -20 ℃ 或 -70 ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.          标准品第一次使用时用 0.5ml 的标本稀释液溶解，放置半小时混匀后使用，用后放在 -20^o C 保存。溶解后浓度分别为 14 、 8 、 3.2 、 1.6 、 0.8 、 0 ng /ml 。

3.         洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例： 1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序

1.          建立标准曲线：设标准孔 6 孔，每孔各加入标准品 50ul 。

2.          加样：待测品孔每孔各加入待测样品 50ul 。

3.          每孔加酶标抗体工作液 50ul 。将反应板置 37 ℃ 120 分钟。

4.          洗板：同前。

5.          每孔加入底物工作液 100ul ，置 37 ℃ 暗处反应 15 分钟。

6.          每孔加入 100ul 终止液混匀。

7.          30 分钟内用酶标仪在 45 0nm 处测 吸光值。

结果计算与判断

1.          所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。

2.          以标准品 14 、 8 、 3.2 、 1.6 、 0.8 、 0 ng /ml 为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。

3.          根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 GIP 含量。

试剂盒性能

              1.   灵敏度 ： 最小的 GIP 检测浓度小于 0.4 ng /ml 。

2.        特异性： 可同时检测重组或天然的大鼠 GIP 。 不与 大鼠其它细胞因子有交叉反应。

3.        重复性：板内、板见变异系数均小于10 ％。

注意事项

              1.   以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

  2.   洗涤过程 很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。

              3.   板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥 。

              4.   本试剂盒宜置 4^o C<, /SPAN>冰箱保存。

  5.   本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！