植物体内脱落酸、赤霉素的分离和测定

相关专题

 

在研究植物生命活动过程中，常常需要准确了解某一激素的含量以及各激素间的比例。因此，植物内源激素的提取分离和测定是植物生理学 实验技术中极其重要的内容。本实验以ABA和GA为例，介绍激素的提取、分离及测定的基本原理和方法。

一、原理 利用脱落酸（abscisic acid，ABA）和赤霉素（gibberellic acid，GA）能溶解于有机溶剂（如丙酮、甲醇）的特性进行提取，将粗提物经过一系列的分离技术（如萃取、薄层层析 或纸层析等），使ABA、GA与其它成分分离。再对纯化的ABA和GA进行生物学鉴定或物理化学鉴定。

（一）生物鉴定1.ABA能抑制植物 器官的生长，在一定的浓度条件下，其抑制程度与浓度呈线性关系。利用这一线性关系就可确定组织中ABA的含量。2.GA能刺激幼嫩植物的节间伸长，特别是矮生植物的茎。在一定浓度范围内，茎的伸长度与GA浓度呈线性关系。因此，根据茎的伸长度就可确定GA的含量。

（二）物理化学鉴定：可采用气相色谱法。

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料：植物叶片、水稻种子及幼苗等；

（二）仪器设备：1.气相色谱仪；2.分液漏斗；3.组织匀浆器；4.旋转蒸发干燥器；5.层析缸；6.华特曼-3号层析纸；7.微量注射器。

（三）试剂：1. 100％甲醇；2. 80％甲醇；3. 石油醚；4. 乙酸乙酯；5. 1mol/LHCl；6. 硅酸GF232；7. 氯仿；8. GA；9. ABA；10. 乙醇；11. 正丁醇；12. 异丙醇；13. 3mol/L氨水。

三、实验步骤与结果计算

（一）脱落酸和赤霉素的提取和分离
1.样品提取（1）取新鲜材料或贮存材料（用100％甲醇固定，放置-10℃冰箱中至待测时）10g，剪碎，加入60ml预冷（＜0℃＝的80％甲醇溶液，匀浆5min，匀浆液在4℃下振荡（或搅拌）24h，过滤。残渣再用20ml甲醇液振荡1h。反复二次，滤液混合。（2）将滤液在旋转蒸发器上干燥减压蒸发（36～38℃）至原体积一半，再加入10ml石油醚提取部分色素，将下层甲醇液取出，弃掉石油醚层，继续减质浓缩至水溶液。在此水溶液中含有IAA、ABA、GA和CTK等。
2.样品萃取将水溶液用1mol/LHCl调pH至2.8～2.5左右。并以与水溶液等体积的乙酸乙酯萃取。将混合溶液装入分液漏斗，分离水相和乙酸乙酯相。取水相再用乙酸乙酯萃取2次。合并乙酸乙酯溶液。此时，CTK（细胞分裂素）存在于水相中，而ABA、GA、IAA存在于乙酸乙酯中。