• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        溶血反应与补体结合试验

        互联网

        3622
        相关专题
         
        一.溶血反应
        免疫血清与其相应的抗原 细胞(血球、细菌及其组织细胞相遇,并在补体的参与下可出现溶细胞反应。依抗原、抗体的种类不同可有溶血反应、溶菌反应等。
        溶菌反应只在某些细菌 中出现(如霍乱弧菌)。应用溶血反应是补体结合反应中不可少的因素。溶血反应是由于抗原(红血球)和抗体(溶血素)进行特异性的结合,并吸着了补体,而使红血球在补体的作用下被溶解,于是产生了溶血现象。
        材料:
        1.抗原:2%绵羊红血球。
        2.抗体:溶血素
        3.补体:取健康豚鼠血清作为补体。
        4.小试管、生理盐水、水浴箱。
        方法:
        1.取小试管3只,按下表加入各物(容量单位为毫升)
        2.将上述3试管放在37℃水浴箱内15—30分钟观察有无凝血现象

         

        试管

        2%红血球

        溶血素(2单位)

        补体(2单位)

        生理盐水

        结果

        1

        0.5

        0.5

        0.5

        0.5

         

         

        2

        0.4

        0.5

        ——

        1.0

         

         

        3

        0.5

        ——

        0.5

        1.0

         







        二.补体结合反应
        当抗原与其对应的抗体结合时,所生成的抗原抗体复合物能从溶液中将补体吸着此即谓补体结合。参与补体结合反应的抗原是透明的溶液,故补体结合现象不能被肉眼看出来,因此必须借助溶血系统(溶血素及相对应的羊血球)作为指示剂,来判定媒质中有无游离的补体,近而推定媒质中未知抗原(或抗体)和已知抗体(或抗原)是否进行了特异性的结合。本反应具有很高的敏感性及特异性,因之常应用于传染病的诊断,特别诊断病毒疾病和梅毒。
        由于参与本反应的各种成分间有着一定量的关系,因此在作本试验之前,必须通过一系列的预备实验来确定各成分的使用量,故本反应的实验方法较为复杂。
        本次实验以伤寒杆菌免疫 血清与其相对应的抗原补体结合试验为例。
        材料:
        1.抗原:伤寒的抽出液
        2.抗体:伤寒杆菌的免疫血清
        3.补体:豚鼠血清
        4.溶血素:抗绵羊血细胞的兔血清
        5.2%绵羊红血球
        6.小试管、试管架、水浴锅。
        方法:
        (一)预备试验(示教说明)
        预备试验包括溶血素效价的滴定,补体效价的滴定,抗原效价的滴定及被检血清的处理。
        (1)溶血素效价的滴定
        按照下表加入各物

        凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管(即1:4000倍稀释)0.5毫升溶血素为一个单位,在溶血反应中常用0.5毫升中含有2个溶血素单位的溶液,所以试验时应取1:2000倍稀释的溶液。
        (2) 补体单位滴定
        依下表加入各试剂:

        能引起完全溶血的最小补体量称为准确单位,上表中第3管(即0.3毫升),但因补体的效价可能有部分损失,故普通稍高的一管为实用单位,实际试验时须用两个实用单位。
        上表的结果为:
        补体标准单位:0.3毫升
        补体实用单位:0.35毫升
        补体两个实用单位:0.70毫升
        因试验时是两个实用单位的补体0.5毫升,可依下列比例关系换算:
        20:0.7=ⅹ:0.5
        ⅹ=14.3
        即须将补体稀释14.3倍,用0.5毫升则含有两个实用单位。
        (1)抗原的滴定
        在用已知抗原测定未知抗体时,必须先滴定抗原效价以决定本试验时所需抗原的最适浓度(反之用已知抗体测定未知抗原时,则需滴定抗体效价)

        如血清对照管呈完全或部分不溶血是为抗补体现象。血清严重污染细菌,混有淋巴液或显著溶血时,常产生很强抗外体作用。又如试管、吸管不清洁,也可出现抗补体。若有抗补体发生,应抽血重试验。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序