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        白介素6的检测方法

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        白细胞介素6(IL-6)是一种具有多重免疫 调节功能的细胞因子。HTLV-1感染的T淋巴母细胞系、单核细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞以及某些肿瘤细胞均可产生IL-6。某些急性炎症、自身免疫性疾病、淋巴细胞恶性肿瘤(如多发性骨髓瘤)等与病人体内IL-6水平异常增高有关。

        ㈠ 原理:IL-6在体外能促进B细胞杂交瘤的生长,故又称为杂交瘤生长因子(HGF)。小鼠B细胞杂交瘤7TD1是一株对IL-6依赖的细胞系,由Van Snick 1986年建立,只有在IL-6存在的培养基中才能生长,可以作为指示细胞来测定待检样品中IL-6水平。这类IL-6依赖的小鼠B细胞杂交瘤细胞系还有MH60·BSF2、B9等。

        ㈡ 方法:主要为3H-TdR掺入法

        IL-6依赖的7TD1细胞用无FCS的RPMI1640洗涤2次

        每次1000rpm,5min,除去原培养液中的IL-6

        ↓

        用10%FCS-RPMI1640调整活细胞数2×104/ml

        ↓

        96孔平底培养板中每孔加100μl 7TD1悬液(2×103/孔)

        ↓

        加入不同稀释度标准IL-6和待检样品(100μl/孔)

        ↓

        37℃,5%CO2孵箱培养48~72h

        ↓

        每孔加3H-TdR 0.5μCi/50μl

        ↓10h

        用多头细胞收集仪收获于玻璃纤维滤纸上

        ↓

        干燥后移入液闪瓶中,加入1ml闪烁液,于液闪仪中测β射线的cpm值。

        计算:

        1. 根据cpm值,将能使7TD1细胞3H-TdR掺入cpm值达到最大值50%的IL-6的活性定为1u/ml。

        2. 以刺激指数(SI)表示。

        ㈢ 试剂和器材

        1. IL-6依赖的7TD1细胞系

        2. 10%FCS-RPMI1640及无FCS的RPMI1640

        3. 3H-TdR

        4. 标准IL-6

        5. PPO,POPOP,二甲苯。

        6. 9999型玻璃纤维滤纸。

        7. 96孔平底培养板

        8. 多头细胞收集仪

        9. CO2孵箱

        10. β液闪计数仪

        ㈣ 注意事项:

        1. 7TD1细胞洗涤要充分、轻柔,每次弃洗涤上清力求彻底。

        2. 避免同位素污染。

        3. 加样品时,应从低浓度到高浓度顺序加。

        4. 加入3H-TdR最适时机是阴性对照95%以上死亡。

        5. 为了增加检测方法的敏感性,可采用新复苏7TD1细胞,或用pH4.0枸椽酸缓冲液处理培养状态的7TD1细胞。

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