利用爪蟾卵母细胞建立人类低密度脂蛋白受体基因表达系统

沃兴德1 , 范春雷1 , 罗艳2 , 钱颖1 , 卢德赵1 , 唐利华1
(1. 浙江中医学院生命科学系, 浙江省杭州市310053 ; 2. 杭州师范学院 生物 化学教研室, 浙江省杭州市310008)
[关键词] 　细胞 生物 学; 　低密度脂蛋白受体基因表达系统; 　细胞核显微注射; 　爪蟾卵母细胞; 　低密度脂蛋白; 　动脉粥样硬化; 　质粒构建
[摘　要] 　目的　在爪蟾卵母细胞中建立人类低密度脂蛋白受体基因的表达系统,此系统可被用于降血脂和抗动脉粥样硬化的研究。方法和结果　冰块麻醉爪蟾,切取卵巢,获得V、VI 期卵母细胞,经用1 g/ L 胶原酶孵育过夜除去卵母细胞外层的卵巢膜和滤泡膜,培养3 天后存活率仍可达95 %以上。用DiI 标记的低密度脂蛋白荧光配体测定膜上结合荧光,发现V、VI 期卵母细胞膜上未见有内源性低密度脂蛋白受体,如将人低密度脂蛋白受体的表达质粒p3. 7 低密度脂蛋白导入爪蟾卵母细胞核中,培养后用DiI 标记的低密度脂蛋白配体测定可见膜上发出红色荧光,用抗低密度脂蛋白受体的 抗体 经免疫荧光检测法测定可见膜上有绿色荧光,免疫胶体金标记透射电镜检测可见膜上有内吞的胶体金颗粒。结论　外源性的人类低密度脂蛋白受体基因能在爪蟾V、VI 期卵母细胞中表达,此低密度脂蛋白受体基因表达系统可用于中药降血脂抗动脉粥样硬化机理的研究。

查看全文