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        染色体银染色法

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        一、实验目的
        通过实验,掌握染色体银染方法。
        二、实验原理
        银染核仁成形区的方法,最早是Goodpasture 和Bloom(1975)提出的Ag-As技术。应用这种技术使人类、哺乳动物、两栖类、植物等的核仁形成区(NOR)特异性染为黑色。这种银染色阳性的NOR称为Ag-NOR。
        银染方法的原理可能是由于转录的rDNA部分有丰富的酸性蛋白,它们具有S-H键和S-S键,容易将Ag+还原为Ag的颗粒,从而在活性的核仁形成区镀上银,呈现为黑色的区域。本实验将介绍染色体核仁形成区的银染显示法(Ag-NOR),并了解Ag-NOR的多态现象。
        三、实验材料
        两栖类或小白鼠骨髓细胞染色体制片不经染色留用的标本片。
        四、实验器具和药品 试剂
        显微镜、冰箱、恒温 水浴 锅、温度计、大培养皿、烧杯、吸管、滴瓶、切片架、切片盒、镊子。
        硝酸银、明胶、甲酸、擦镜纸。
        五、实验方法和步骤
        (一) 把大培养皿放入 水浴 中,升温至65~70℃,同时用烧杯预热 蒸馏 水。
        (二) 将标本片平放在预热的培养皿垫枕上,用50%硝酸银溶液与2%明胶溶液以2:1混匀后,立刻滴加到染色体制片上,复以盖片(或擦镜纸)。
        (三) 待反应液由无色透明变黄,最后变成棕褐色后(约2~4分钟),立即取出载片,用预热的 蒸馏 水彻底冲洗,晾干后镜检。染色适度的片子,染色体为金黄色,NORS为黑色。
        注意事项:
        (一) 用于Ag-NOR染色的染色体标本,最好是新鲜制备的,以一周以内的制片为好,同时片内要求有众多的分裂相。
        (二) 银染用的两种反应液最好新配,一时用不完可装棕色瓶中,冰箱4℃保存,但不得超过10天。
        (三) 配制和使用硝酸银溶液时要格外小心,不要滴洒在地上、桌上及手上等处,氧化为黑色的污点极难除去。
        (四) 在明胶中添加甲酸可促进反应过程(2克明胶+99毫升蒸馏水+1毫升甲酸)。
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