• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        火箭电泳技术

        互联网

        1366
        (一)原理
        抗原在含有抗体的凝胶中进行电泳,在电场作用下,抗原向一个方向移动,在移动的过程中,逐步与凝胶中的抗体结合而沉淀呈火箭状。沉淀峰面积越大,说明抗原量越多,二者呈正相关,因此可用于抗原的定量测定。此法具有敏感性高、快速等优点。
        (二)材料与 试剂
        1.0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液配成2%的琼脂。
        2.抗原与抗体
        3.其它材料同免疫电泳。
        (三)操作方法
        1.将2%琼脂煮沸溶化后,放入60℃ 水浴 箱中。
        2.将适量的抗体用0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液稀释至琼脂同样的体积量,放入60℃ 水浴 。
        3.将两者充分混合,立即倒成平板。
        4. 琼脂 板冷却后在一侧打孔,孔径3mm,孔距6mm。
        5.于孔内分别加入不同浓度的定量抗原。
        6.电泳 孔端接负板。电流强度3mA/cm(或电压10V/cm),电泳时间2h~10h。
        7.停止电泳,将 琼脂 板于生理盐水中浸泡24h,中间换液数次。
        8.染色、脱色、干燥同免疫电泳。
        9. 抗体 最适量的测定 将已知抗原与 抗体 以不同浓度梯度进行方阵试验,找出所形成的火箭状沉淀线,轮廓清晰,前端尖窄而闭合的抗体最小量作为抗体的最适用量。
        10.标准曲线的绘制 以抗体的最适用量制成琼脂板,分别用已知的不同浓度抗原(同一浓度的也必须做一批,以求平均值)进行电泳,泳毕后染色,测其沉淀峰的高度(或面积),然后以抗原量为纵轴,沉淀峰高度(或面积)为横轴,制成标准曲线。
        11.对照组的设置 在测未知抗原的同时,必须设置已知标准抗原作为电泳对照。
        (四)结果判定
        在已知标准抗原所形成的沉淀峰的高度,在许可的误差范围内,测其待测抗原所形成的沉淀峰的高度(或面积),然后从标准曲线中查出它们相应的抗原含量。
        (五)注意事项
        1.抗原抗体的用量应当预试,抗原太浓,在一定时间内不能达到最高峰,抗体太浓,则沉淀峰太低而无法测量。预试峰的合适高度为2cm~5cm。
        2.用优质琼脂糖。
        3.一定条件下,电泳时间要根据峰的形成情况而定。如形成尖角峰形,表示已无游离抗原。如呈钝圆形,前面有云雾状,表示还未到终点。
        4.把琼脂板置于电泳槽上搭好桥,再加抗原,或启动电源后,电压极低时加样,以免造成基部过宽的峰型。
         
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序