高通量表达蛋白

表达蛋白

 

    在获得为表达准备的克隆之后，可以利用96孔板小规模地表达这些目的蛋白来选择一些能生产可溶蛋白质的克隆。传统方法(Doyle等，2002)和商用的机器人自动仪(Lesley，2001)技术都可以实现高通量表达和纯化毫克级的蛋白质，编者预期的大规模处理方法是发展一种特别设计的自动化方式。表达毫克级的蛋白质利用传统方法完成至少需要发酵500～1000ml的培养液，如果将96个蛋白质同时表达，不仅需要较多的人手、较长的时间，还需要足够的培养器皿和大量的培养基。编者设计了一种紧凑型高性能96管发酵槽，每个管的培养容积是65ml(图7．1)。优化的通风和培养基环境可以完成光密度(OD)(600nm)达到40的高密度细胞的生长，这对于生产微克级蛋白质来说细胞密度已经足够，完全可以满足大多数情况的需求。与常规的发酵工序相比，较低的细胞培养容积对于特殊的应用――如使用富¹⁵ N的介质(NMR研究)或富硒介质(X射线晶体学研究)――在成本上是更合算的。发酵槽的一个完整的运行周期，包括从预培养开始到细胞培养可以收获的时间一般是6h。

 

并行表达96个蛋白质的发酵槽

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