双向电泳技术在筛选膀胱癌特异标志蛋白中的应用

【摘要】　目的 建立高分辨率的膀胱移行上皮癌不同时期的双向凝胶电泳图谱，并初步分析其蛋白质表达情况，寻找其差异表达蛋白，为寻找癌变相关蛋白奠定实验基础。方法 用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离膀胱移行上皮癌不同分期的组织，凝胶考马斯亮蓝染色，然后利用GS-800 Calibrated Densitometer凝胶成像系统获取图像，用PDQuest2D分析软件对图像进行背景消减、斑点检测、匹配、斑点位置重复性的系统分析，寻找差异表达蛋白。在此基础上应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）得到相应的肽质指纹图谱，然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质。结果 获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱，三块胶的平均蛋白质匹配率达76%，蛋白质点在位置上有较好的重复性，不同胶间的蛋白质点在等电聚焦IEF方向偏差是（0.9 8±0.2 6）mm，SDS-PAGE方向偏差是（1.2 3±0.22）mm，并且得到了若干与细胞增生、分化、周期调控信号转导或肿瘤发生有关的蛋白质，例如SFN，热休克蛋白-27等。结论 为进一步探讨癌变机理及筛选其特异性分子标志物打下方法学基础。

后基因组时代，生物学家们的研究重心已经从解释生命的所有遗传信息转移到在整体水平上对生物功能的研究。2O世纪9O年代中期，在人类基因组计划研究发展及功能基因组学的基础上，国际上萌发产生了一门在整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律的新兴学科——蛋白质组学（Proteomics）。在基因转录水平的研究只能在一定程度上反映基因表达产物的变化，而真正发挥功能的蛋白质要经过转录后加工、翻译调控以及翻译后加工等许多步骤和调控才能形成，因此直接检测蛋白质表达水平及其相互作用对于全面了解细胞生理、病理过程显得尤为重要，蛋白质组学及其相关技术为解决以上问题提供了理论基础与技术手段。目前蛋白质组学研究范围主要有大规模的蛋白质鉴定及转录后修饰的鉴定；差异蛋白质表达分析；蛋白质相互作用分析等方面。分析鉴定组织、细胞、体液等在特定条件下蛋白质表达情况，建立其蛋白质表达谱是差异蛋白质分析的基础，也是构建蛋白质表达数据库的前提和目的之一。根本上讲：蛋白质组技术是一种分子生物学的大通量筛选技术，目的在于归类细胞中的蛋白质的整体归类，鉴定并分析感兴趣的个体蛋白，最终阐明它们的关系和功能。以双向凝胶电泳技术为基础，结合质谱技术研究和鉴定生理和病理状态下的蛋白质表达情况是构建蛋白质表达数据库的主要方法，目前已得到广泛的认可。我们应用以上技术对不同分期膀胱癌移行上皮癌的蛋白质表达情况进行了较深人研究，并在此基础上鉴定出了若干可能与膀胱癌移行上皮癌发生发展相关的一些指标。 

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