高效液相色谱仪的使用方法

    仪器名称：高效液相色谱仪

　　仪器型号：Agilent1100

　　生产厂家：Agilent

　　使用方法：

　　(一)、开机：

　　1、打开计算机，进入WindowsNT（或Windows2000）画面，并运行BootpServer程序。

　　2、打开1100LC各模块电源。

　　3、待各模块自检完成后，双击Instrument1Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。

　　4、从“View”菜单中选择“MethodandRuncontrol”画面，单击”View”菜单中的“ShowTopToolbar”，“Showstatustoolbar”，“Systemdiagram”，”Samplingdiagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

　　5、把流动相放入溶剂瓶中。

　　6、打开Purge阀。

　　7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入泵编辑画面。

　　8、设Flow：5ml/min，单击OK。

　　9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pumpcontrol选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。

　　10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击PumpControl选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭

　　Purgevalve。

　　11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。

　　12、单击泵下面的瓶图标，如图所示（以二元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。

　　（二）数据采集方法编辑：

　　1、开始编辑完整方法：

　　从“Method”菜单中选择“Editentiremethod”项，如上图所示选中除“Dataanalysis”外的三项，单击Ok，进入下一画面。

　　2、方法信息：

　　在“MethodComments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。

　　单击Ok进入下一画面。

　　3、泵参数设定：（以二元泵为例）

　　在“Flow”处输入流量，如1ml/min，在“SolventB”处输入70.0，(A=100-B)，也可Insert一行”Timetable”，编辑梯度。在“PressureLimitsMax”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。

　　单击Ok进入下一画面。

　　4、自动进样器参数设定：

　　选择合适的进样方式，如图所示，进样体积1.0ul，洗瓶位置为6号。“StandardInjection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“InjectionwithNeedleWash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Useinjectorprogram”---可以点击Edit键进行进样程序编辑。

　　点击Ok进入下一画面。

　　5、柱温箱参数设定：

　　●在”Temperature”下面的方框内输入所需温度，并选中它，点击”more>>”键，如图所示，选中”Sameasleft”---使柱温箱的温度左右一致。

　　●点击ok进入下一画面。

　　6、VWD检测器参数设定：

　　●在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm，在”Peakwidth(Responsetime)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如>0.1min(2s)。

　　●在Timetable中可以“Insert”一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。点击ok进入下一画面。

　　7、DAD检测器参数设定：

　　●检测波长：254nm，BW=30nm，参比波长=350nm，BW=100nm；

　　●检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。Peakwidth（Responsetime）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit―狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。

　　●点击Ok进入下一画面。

　　8、RID检测器参数设定：

　　●色谱条件：

　　进样体积：20ul。光学单元温度：Off。

　　极性：正。峰宽(响应时间)：4s。

　　●如图所示：“OpticalUnitTemperature”---若环境温度控制在±2℃，设定为Off，若环境温度不稳定，则设定光学单元温度为高于环境温度5度，以防样品在池中沉淀。“Peakwidth”---大多数分析设为4S，只有在高速分析下设为更短。“Automaticrecyclingafteranalysis”---在不进行分析时可以让流动相循环，节省流动相，检测器连续运行，可随时投入使用。

　　●****点击RID图标，选择RIDControl：Heater设为On，若要循环流动相，必须将“RecyclingValve”设为ON。手动purge参比池，将其设为On，并输入Purge时间。

　　9、FLD检测器参数设定：

　　色谱条件：

　　●样品：P/N01018-68704用甲醇稀释为1：10。

　　●进样体积：5ul。

　　●柱温箱：30℃。EX=246nm，EM=317nm，PMT=10。

　　●响应时间=4s.停止时间：出峰完毕。

　　●ExcitationA：激发波长：200-700nm，步长为1nm，或ZeroOrder。

　　●Emission：发射波长：280-900nm，步长为1nm，或ZeroOrder。

　　●PMT：大多数应用适当的设定值为10，若高浓度样品峰被切平头，则减少PMT值。

　　●“Peakwidth”：大多数应用设为4s，只有快速分析采用小的设定值。

　　●MultiEx：多波长及光谱（激发）。

　　●MultiEm：多波长及光谱（发射）。

　　●同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。

　　10、在“Runtimechecklist”中选中“Dataacquisition”，单击Ok。

　　11、单击“Method”菜单，选中“Savemethodas”，输入一方法名，如“test”，单击Ok。

　　12、从菜单“View”中选中”Onlinesignal”，选中Windows1，然后单击Change钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击Ok.(如同时检测二个信号，则重复12，选中Windows2)。

　　13、从“Runcontrol”菜单中选择“Sampleinfo”选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Datafile”中选择“Manual”或“Prefix”。

　　区别：Manual--每次做样之前必须给出新名字，否则仪器会将上次的数据覆盖掉。Prefix―在Prefix框中输入前缀，在Counter框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。

　　14、从Instrument菜单选择Systemon。

　　15、等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Runmethod”，进样。

　　（DAD，VWD色谱图如下所示：）

　　（三）、数据分析方法编辑：

　　1、从“View”菜单中，单击“Dataanalysis”进入数据分析画面。

　　2、从“File”菜单选择“Loadsignal”，选中您的数据文件名，如下图所示。单击Ok。

　　3、做谱图优化，从“Graphics”菜单中选择“Signaloptions”选项，。从Ranges中选择Autoscale及合适的显示时间，单击ok，或选择”UseRanges”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。

　　4、积分：

　　(1)、从“Integration”中选择“Autointegrate”，如积分结果不理想，再从菜单中选择“IntegrationEvents”选项，选择合适的Slopesensitivity，Peakwidth，Areareject，Heightreject。

　　(2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项，则数据被积分。

　　(3)、如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。

　　(4)、单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。

　　5、打印报告：

　　(1)、从“Report”菜单中选择“Specifyreport”选项，进入如上画面。

　　(2)、单击“QuantitativeResults”框中Calculate右侧的黑三角，选中Percent（面积百分比），其它选项不变。

　　(3)、单击Ok.

　　(4)、从“Report”菜单中选择“Printreport”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击Report底部的“Print”钮。

　　(四)、关机：

　　●关机前，用100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如ACN），然后关泵，（适于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]

　　●退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关)