如何做好肥达、外斐试验

作者：赵晴  昆明市东川区人民医院检验科

肥达反应(Widal test):

用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H抗原，检测受检血清中有无相应抗体的半定量凝集试验，称肥达反应(Widal test)。本试验与细菌分离培养同时进行或在前者失败的情况下，能辅助诊断伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起的肠热症。

外斐反应(Wiel-Felix):

斑疹伤寒等立克次体与变形杆菌某些X株的菌体抗原(OX_k、OX₁₉ 、OX₂抗原)具有共同的耐热性多糖类属抗原，常用后者代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，这种交叉凝集试验称为外斐反应，用于立克次体病的辅助诊断。

传统的肥达、外斐试验采用试管法，存在试剂用量大、结果不易观察等缺点，现介绍一种较实用的平板法，试剂用量仅为试管法1/2、结果易判定等优点。

试验的第一步（准备）：

准备一块U型反应板，长18厘米，宽9 厘米，每孔容积1 毫升，并在上面做出清晰标识。

试验第二步（加样）：

为方便说明加样步骤,先看反应板示意图：

第五排     ○   ○    ○    ○    ○     ○    ○     ○

第四排     ○   ○    ○    ○    ○     ○    ○     ○

第三排     ○   ○    ○    ○    ○     ○    ○     ○

第二排     ○   ○    ○    ○    ○     ○    ○     ○

第一排     ○   ○    ○    ○    ○     ○    ○     ○

（从底部算起）

 O    H    甲    乙    丙    OX_k   OX₁₉    OX₂  

操作步骤

试验第三步：混匀

用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度（100转/分）混合3分钟。

试验第四步：恒温

放37℃度水浴箱恒温24小时，放水浴箱时请用纸板或其它物品做必要遮挡，此步不可省略，否则，请看下图：

这是遮盖纸板收集到的水滴。若这些水滴至反应板内，看结果时就真是葫芦僧乱判葫芦案了。做任何试验，细节真的很重要。

结果判定：

肥达反应临床意义：

1、  一般O>1:80,H>1:160,甲、乙、丙>1:80才有临床意义，或在疾病早期及中后期分别采集两次血清，若第二份血清比第一份的效价高4倍以上增高具有诊断价值。

2、  O及甲、乙其中之一项或丙凝集效价增高时，可以诊断副伤寒甲、乙、丙的某一种。

3、  O抗原产生的抗体为lgM, 出现较早，存在于血清的时间较短，与相应的抗血清反应时呈颗粒状凝集;H抗体为lgG, 出现较迟，持续存在的时间较长，与相应的抗血清呈絮状反应。

4、  O高H不高：

a .疾病早期；

b.沙门菌属中其它菌种感染引起的交叉反应；

c.H→O变异的沙门菌引起的感染。

建议一周后复查，如一周后H也有升高，可证实为肠热症。

5、  H高O不高：

a .可能为疾病的晚期；

b.以往患过伤寒、副伤寒或接受过预防接种；

c.回忆反应等。

外斐反应临床意义：

1、  血清抗体效价达1：160以上有意义。病程中双份或多份血清试验，若效价有4倍以上增高具有诊断意义。

2、  往往有些病例在整个疾病过程中效价不见上升，如复发型斑疹伤寒及约15%的经疫苗接种后感染斑疹伤寒的病例。

3、  有些轻症斑疹伤寒或某些发病严重者，其它血清学试验阳性，但其外斐反应可阴性。

4、  恙虫病立克次体和变形杆OX_k株有共同的抗原成分，恙虫病患者血清与OX_k抗原发生凝集而不与OX₁₉、OX₂  发生凝集。

5、  假阳性反应还发生在变形杆菌尿路感染、伤寒、钩端螺旋体病，回归热、疟疾及各种病因引起的严重肝病的病人血清检查，孕妇也往往呈假阳性反应。因此，对外斐反应结果应结合临床慎重分析和判断。

实例分析：

此板肥达、外斐试验结果为阴性。如果足够细心的话，可以看到OX_k第二排（血清最终稀释倍数1：40）出现了异常，是因为变形杆菌抗原很不稳定，特别是经保存以后往往会使血清效价增高，尤以OX_k抗原为甚。因而一般不宜作长久保存，并应与阳性病人血清校正其凝集性。

此板O抗原第二排（血清最终稀释倍数1：40）出现了凝集，

此板O抗原与相应的抗血清（血清最终稀释倍数1：320）呈现了颗粒状凝集;H抗原与相应的抗血清（血清最终稀释倍数1：320）呈现了絮状凝集。

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