硝酸银染色
互联网
28594
银染的方法种类很多，目前有文献报道的就有 100 多种。但是其准确的染色机制还不是特别的清楚。大致的原理是银离子在碱性 pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。
由于银染的灵敏度很高，可染出胶上低于 1 ng/蛋白质点，故广泛的用在 2D 凝胶分析上。待找到自己感兴趣的蛋白质点后，再通过考染富集该目的点，然后做进一步的肽段指纹图谱分析（PMF）或序列测定。随着质谱技术的不断完善和发展，对银染后的 f mol 级的蛋白质点直接测定已非难事。这里介绍一种可兼容质谱分析的银染方法，实验程序如下：
| Step | Solution (250ml per gel) | Gel Type | |
|---|---|---|---|
| 固定 |
25ml acetic acid, 100ml methanol 125ml milli-Q water |
1mm unbacked 2x15 min |
1mm on film or glass support or 1.5 unbacked 2x60 min |
| 敏化 |
75ml methanol, 0.5g Na2SO3, 17g NaAc, milli-Q water to 250ml |
30 min | 60 min |
| 漂洗 | 250ml milli-Q water | 3x5 min | 5x8 min |
| 银染 | 0.625g AgNO3, milli-Q water to 250ml | 20 min | 60 min |
| 漂洗 | 250ml milli-Q water | 2x1 min | 4x1 min |
| 显色 |
6.25g Na2CO3 , 100μ formaldehyde, milli-Q water to 250ml |
4 min | 6 min |
| 终止 | 3.65g EDTA, milli-Q water to 250 ml | 10 min | 40 min |
| 漂洗 | 250ml milli-Q water | 3x5 min | 2x30 min |
银染注意事项：
1. 很多银染程序都使用了戊二醛（glutardialdehyde），它能提高银染的灵敏度和染色结果的重复性，但是因为戊二醛会修饰蛋白质，从而会影响对蛋白质点的质谱鉴定和分析；
2. 保证所有的染色器皿绝对的干净，可使用玻璃或塑料做染色器皿；
3. 水的纯度对染色结果好坏影响是很大的，至少要用双蒸水（导电率<2μS），有条件的可使用 Millipore water；
4. 染色过程中避免手去接触凝胶，必须戴上一次性手套或无粉乳胶手套；
5. 所用的化学试剂一定是要分析纯 （ AR ）。
