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        制备多克隆抗体免疫方案及免疫效价的检测

        互联网

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        抗原注射途径可根据不同抗原及试验要求,选用皮内、皮下、肌肉、静脉或淋巴结内等不同途径注入抗原进行免疫。一般常采用背部、足掌、淋巴结周围、耳后等处皮内或皮下多点注射。初次免疫与第二次免疫的间隔时间多为2~4周。常规免疫方案为抗原加CFA皮下多点注射进行基础免疫;再以免疫原加IFA作2~5次加强免疫,每次间隔2~3周,皮下或腹腔注射加强免疫。完成免疫程序后,先取少量血清测试抗体效价达到要求时,即可从动物心脏穿刺(豚鼠及家兔),颈静脉或颈动脉放血(家兔、羊及马匹)。待血液凝固后,离心沉淀分离出血清,加入0.1%叠氮钠作为防腐剂。以可溶性蛋白抗原免疫家兔为例,具体免疫方案如下。

        主要材料和试剂

        1. 健康雄性家兔3只;体重2.5Kg左右,4~5周龄

        2. CFA和IFA;

        3. 抗原(纯化人血清免疫球蛋白)

        4. 无菌注射器,平皿

        5. 刻度吸管,毛细吸管,研钵

        免疫方法

        按每只家兔取纯化抗原1mg用1~2ml PBS或生理盐水稀释,加等体积CFA充分乳化后,于家兔背部及后腿肌肉、皮下多点注射。第一次免疫后间隔1~2周再以相同抗原1mg/1ml加等体积IFA乳化后,注入后腿肌肉或背部皮下多点加强免疫。尔后每隔2~3周按第二次免疫法重复加强免疫。每次免疫后7~14d抽取少许静脉血,分离血清,以备检测免疫效果。于第4次免疫后5~7d试血。

        免疫效价的检测

        于家兔耳静脉取血1~2ml,分离血清。用环状沉淀试验测定抗体效价达1:5000以上(稀释抗原),或用琼脂双向扩散试验测定抗体效价达1:16以上(稀释抗体),即可从心脏或颈动脉放血,或静脉采血,分离血清,进行抗体的纯化及检测。

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