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        细胞分裂素的生物鉴定(萝卜子叶增重法)

        互联网

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        一、原理

        细胞分裂素有促进萝卜子叶增大(鲜重增加)的效应。可先做出细胞分裂素浓度与子叶重量增加的关系曲线,再以待测样品进行对比试验,就可鉴定样品中细胞分裂素的浓度或效价。

        二、仪器与用具

        培养皿(直径9cm)5套;圆形滤纸5张;搪瓷盘(带盖)1个;镊子1把;手术剪1把。

        三、试剂

        漂白粉适量;

        5mg/L激动素或6-BA溶液。

        四、方法

        1、种子萌发取均匀一致的萝卜种子200粒,用饱和漂白粉溶液消毒20min并洗净,摆放在垫有滤纸并用蒸馏水湿润过的带盖搪瓷盘中,25℃暗中催芽。约30h后,即萌发而展开一大一小两片子叶。从每个幼苗上切下较小的一片子叶,注意子叶上不能残留下胚轴。选择大小一致的子叶50片供试。

        2、子叶培养取直径9CM的培养皿5套编号,并在各培养皿垫一张与皿底大小相同的滤纸,从1号至5号培养皿分别加5.0、0.5、0.05、0.005mg/L的激动素或6-BA水溶液和蒸馏水各3ml。溶液稀释方法同IAA,在各个培养皿的滤纸上放10片子叶,盖好皿盖,并把培养皿放在垫有湿润滤纸的搪瓷盘上,用玻璃板将盘子盖好,以维持高湿度,在荧光灯下25℃培养3天,用分析天平称每个子叶鲜重,求其平均数。

        3、以每一处理的子叶平均重为纵坐标,激动素或6-BA浓度的对数为横坐标,绘出两者的关系曲线。用同样方法以未知样品溶液培养萝卜子叶,与标准曲线比较,即能大致确定未知样品细胞分裂素的含量或生物效价。

        五、附注

        进行未知样品分析时,需经提纯,除去植物材料中的糖分和无机盐等物质,以防样品在培养期间发霉。

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