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        染色体标本制备与观察实验操作规

        互联网

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        染色体制片技术显示染色体一般的形态和结构,成功的关键是获得大量染色体缩短适宜的分裂细胞。

        1. 压片法

        ① 取材:在适当的时间选取细胞分裂旺盛的组织。

        ② 预处理:秋水仙素进行活体或离体处理。

        ③ 固定:卡诺固定液固定,迅速杀死生活细胞使染色体的组成蛋白变性,保持染色体形态和结构。

        ④ 解离:1mol/L HCl60℃进行酸解,不同的材料的酸解时间不同。

        ⑤ 染色:改良石炭酸品红染色。

        ⑥ 压片染色后盖上盖片,用大拇指按压有材料的部位,粗滤纸吸干多余染液,再用铅笔头轻敲,使重叠细胞分散,得到理想的分裂相。

        ⑦ 观察:低倍镜找到分散良好的分裂相后换高倍镜或油镜。

        ⑧ 绘图:会制分散良好的细胞染色体图或拍照进行核型分析。

        2. 去壁低渗法

        ① 前低渗:经预处理的材料转入 0.075mol/L 或蒸馏水中室温下 30min。

        ② 酶解去壁:纤维素酶和果胶酶混合液处理 2~4h。

        ③ 后低渗:洗去酶液,蒸馏水处理 10~30min。

        ④ 固定:制备细胞悬液倒去蒸馏水将材料充分夹碎,加入固定液。

        ⑤ 制片:用吸管吸取细胞悬液,高度 30~40cm,滴在预冷的载玻片上,在酒精灯火焰上微微加热,室温晾干。

        ⑥ 染色:10% Giemsa 染液染色。

        ⑦ 观察:低倍找到分散良好的分裂向后换高倍镜观察。

        ⑧ 绘制:分散良好的细胞染色体图或拍照进行核型分析。

        3. 注意事项

        显微镜使用完毕后须对油镜头进行清洁,并将电源关闭,罩上防尘罩。

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