• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        血糖的测定及激素对血糖浓度的影响

        互联网

        12255

        I . 邻甲苯胺法(O-T法)

        【基本原理】

        葡萄糖的醛基与邻甲苯胺在热醋酸溶液中缩合成葡萄糖基胺,再脱水生成希夫氏(Schiff)碱,然后经分子重排,生成一组蓝绿色化合物,在630nm处有一吸收峰,吸光度大小与血糖浓度成正比。

        【器材】

        水浴箱、 试管、分光光度计。

        【 试剂 】

        1.邻甲苯胺 试剂 取冰醋酸(AR)940ml,加入硫脲(AR)1.5g,溶解后加入邻甲苯胺60 ml混匀,置棕色瓶中,室温保存。新配试剂应放置24小时后(待老化)使用。此试剂腐蚀性极强,应避免与皮肤接触而造成灼伤。

        2.12mmol/L苯甲酸溶液 称取苯甲酸1.4g,加入蒸馏水900ml,加热助溶,冷却后加蒸馏水至1000ml。

        3.葡萄糖标准贮存液(100mmol/L) 准确称取无水葡萄糖(预先置80℃烤箱中干燥至恒重,移置干燥器中保存)1.802g,用12mmol/L苯甲酸溶液溶解,移至100ml容量瓶中,再以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度,摇匀,移入棕色瓶中,冰箱内保存。

        4.葡萄糖标准应用液(5mmol/L)准确吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml,置于100ml容量瓶中,再以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度。

        【操作步骤】

        混匀,置沸 水浴 中煮沸12分钟,取出置流水中冷却5分钟用分光光度计波长630nm,以空白调零,读取各管吸光度。

        [计算]

        [注]

        1.邻甲苯胺与葡萄糖的反应并非特异 ,其他糖在反应中亦能产生与葡萄糖相似的吸收光谱,它们的相对吸光度比率分别为:葡萄糖=1.00;果糖=0.06;甘露糖=0.96;半乳糖=1.42;蔗糖=0.16。但这些糖中只有葡萄糖、果糖、半乳糖存在于正常人血清中,而后两者在正常人血液中含量甚微,不影响试剂测定结果。

        2.葡萄糖与邻甲苯胺的呈色强度与反应条件(邻甲苯胺和冰醋酸的批号、试剂配制后保存的时间以及加热温度和时间)有关。因此,各管的反应条件必须完全一致。

        3.邻甲苯胺为浅黄色油状液体,易被氧化成红棕色,用此种邻甲苯胺配制的试剂、空白管颜色深,反应灵敏度低,严重影响测定结果。须经以下方法处理方可应用:在500ml邻甲苯胺中加入盐酸羟胺0.5g,置50~60℃ 水浴 中20分钟并不时摇动,使邻甲苯胺还原,颜色变浅。如上述处理不够理想,则将邻甲苯胺用全玻璃 蒸馏 器重 蒸馏 ,收集199~201℃无色或浅黄色的流出液,置棕色瓶加黑纸袋避光密封保存。

        II. 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响

        【基本原理】

        人和动物体内,血糖浓度受各种激素调节而维持恒定。胰岛素能降低血糖;其他很多激素则具有升高血糖的作用,其中以肾上腺素作用较为迅速而明显。胰岛素促进肝脏和肌肉将葡萄糖合成糖元,又加强糖的氧化作用,故可以降低血糖;肾上腺素促进肝糖元分解而增高血糖。

        此实验观察家兔注射胰岛素和肾上腺素前后的血糖浓度变化。

        【器材】

        注射器 、针头、刀片、 分光光度计 。

        【试剂】

        1.肾上腺素和胰岛素

        2.草酸钠

        3.25%葡萄糖

        【基本操作】

        1.动物准备

        取正常家兔两只,实验前预先饥饿,称体重(一般为2~3kg)。

        2.取血

        一般多以耳缘静脉取血,先去毛,用二甲苯擦拭兔耳,使其血管充血,再用干棉球擦干,于放血部位涂一薄层凡士林,再用粗针头刺破静脉放血,将血液收入抗凝管中(每ml血约需2mg草酸钠)边收集边摇匀,以防凝固。用干棉球压迫血管止血。

        3.注射激素后取血

        取饿兔血后,其中一只兔皮下注射胰岛素,剂量按0.75单位/公斤体重计算,并记录注射时间。一小时后再取血。取血后立即腹腔或皮下注射25%葡萄糖液10ml,以免家兔发生胰岛素性休克而死亡。

        另一只兔皮下注射肾上腺素,剂量按0.4mg/公斤体重计算,并记录注射时间。半小时后再取血。

        [计算]

        算出注射胰岛素后血糖降低和注射肾上腺素后血糖增高的百分率。

        测血糖常用化学法有邻甲苯酚法,常用酶法为葡萄糖氧化酶法、己糖 激酶 法。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序