溶血与凝聚检查法 实验指导

药理学实验

溶血与凝聚检查法

【目的】

学习溶血性试验的基本操作方法。

【原理】 溶血系指红细胞破裂、溶解的一种现象。多种中草药（如人参、桔梗、远志和甘草等）含有皂甙，可引起溶血。为了保证用药安全，以中草药制成的注射剂（特别是供静脉注射者）应考虑作溶血检查。

【器材】 离心机、 离心管 、小烧杯、竹签或玻棒（去纤维蛋白用）、 试管 、 试管 架、吸管、恒温箱或恒温 水浴 锅等。

【药品】 5%桔梗溶液、生理盐水（NS）、蒸馏水

【方法】按《中华人民共和国药典》2005年版附录118页进行。

1.2%红细胞混悬液的制备 取新鲜兔或羊全血数毫升（约20ml），加入含玻璃珠的锥形瓶中振摇10分钟，或用玻璃搅动血液，除去纤维蛋白，使成脱纤血液。

加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，以每分钟1500～2000转离心5分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2～3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2%的红细胞混悬液，供实验用。

2.供试品溶液的制备 除另有规定外，临床用于非血管内给药的注射剂，

以各药品使用说明书规定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1：3稀释后作为供试品溶液。

3.检查法 取洁净试管5支，编号，1、2号管为供试品管，3号管为阴性对照管，4号管为阳性对照管，5号管为供试品对照管。按下表所示依次加入2%红细胞混悬液、0.9%氯化钠溶液或蒸馏水，混匀后，立即置37±0.5℃的恒温箱或 水浴 中进行温育3小时后观察溶血和凝聚反应。将结果填入表13。

表 13 溶血性检查结果

试 管 编 号	1	2	3	4	5
2%红细胞混悬液（ml） 0.9%氯化钠溶液（ml） 蒸馏 水（ ml） 供试品溶液（ ml）	2.5 2.2 0.3	2.5 2.2 0.3	2.5 2.5	2.5 2.5	4.7 0.3
结 果

注：“ +”表示溶血或凝聚，“-”表示不溶血或不凝聚，“±”表示部分溶血或凝聚

如实验中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留，表明有溶血发生；如红细胞全部下沉，上清液无色澄明，或上清液虽有色澄明，但1号管和5号管比色无明显差异，则表明无溶血发生。

若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判断是凝聚还是假凝聚。

若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝聚物置于载玻片上，在载玻片边缘滴加2滴0.9%氯化钠溶液，置显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，若凝聚物不被摇散或载玻片上不被冲散者为凝聚。

【结果判断】 当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若供试品管中的溶液在3小时内不发生溶血和凝聚，判供试品符合规定；若供试品管中的溶液在3小时内发生溶血和（或）凝聚，判供试品不符合规定.

【注意】

1.兔心脏取血法，背位固定，消毒皮肤，用8或9号针头，20ml注射器（消毒﹑干燥），在心脏搏动最明显处作穿刺，针头感到心脏跳动时，再将针头刺进心脏，取血后，迅速将针头拔出，这样心肌上的穿孔较易闭合。

2.加液顺序：RBC混悬液→供试品。

3.阳性对照品： 蒸馏 水。

【思考题】

与药物有关的哪些因素可以引起溶血现象？如何进行溶血性试
验？