酮体的生成和利用

【 实验目的 】

【 实验原理 】

在肝脏线粒体中，脂肪酸经β-氧化生成的过量乙酰辅酶A缩合成酮体。酮体包括乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮三种化合物。肝脏不能利用酮体，只有在肝外组织，尤其是心脏和骨骼肌中，酮体可以转变为乙酰辅酶A而被氧化利用。

本实验以丁酸为基质，与肝匀浆一起保温，然后测定肝匀浆液中酮体的生成量。另外，在肝脏和肌肉组织共存的情况下，再测定酮体的生成量。在这两种不同条件下，由酮体含量的差别我们可以理解以上的理论。本实验主要测定的是丙酮的含量。

【 实验材料 】

1. 实验器材

试管；移液管；锥形瓶；滴定管及架。

2. 实验 试剂

(1)0.1% 淀粉液。

(2)0.9% NaCl溶液。

(3)15% 三氯乙酸。

(4) 10％ NaOH溶液。

(5)10％ HCl溶液。

(6) 0.5mol/L丁酸溶液：取5ml丁酸溶于100ml 0.5mol/L NaOH中。

(7) 0.1mol/L碘液：I2 12.5g和KI 25g加水溶解，稀释至刻度1L，用0.1mol/L Na2S2O3标定。

(8) 0.02mol/L Na2S2O3: 24.82g Na2S2O3·5H2O和400mg无水Na2CO3溶于1L刚煮沸的水中，配成0.1mol/L溶液，用0.1mol/L KIO3标定。临用时将标定Na2S2O3溶液稀释成0.02mol/L。

【 实验操作 】

1.标本的制备：

将兔致死，取出肝脏，用0.9% NaCl洗去污血，放滤纸上，吸去表面的水分，称取肝组织5g置研钵中，加少许0.9% NaCl至总体积为10ml，制成肝组织匀浆。另外再取后腿肌肉 5g，按上述方法和比例，制成肌组织匀浆。 2.保温和沉淀蛋白质：

取试管3只，编号，按下表操作：

管号 试剂	A	B	C
肝组织匀浆	—	2.0 ml	2.0 ml
预先煮沸的 肝组织匀浆	2.0 ml	—	—
pH 7.6的 磷酸盐缓冲液	4.0 ml	4.0 ml	4.0 ml
正丁酸	2.0 ml	2.0 ml	2.0 ml

43℃水浴保温60分钟

肌组织匀浆	—	4.0 ml	—
预先煮沸的 肌组织匀浆	4.0 ml	—	4.0 ml

43℃水浴保温60分钟

15%三氯醋酸

3.0 ml

3.0 ml

3.0 ml

摇匀后，用滤纸过滤，将滤液分别收集在3支 试管 中,为无蛋白滤液。
3.酮体的测定
取锥形瓶3只，按下述编号顺序操作：

编 号 试 剂	1	2	3
无蛋白滤液	5.0 ml	5.0 ml	5.0 ml
0.1mol/L I 2 -KI	3.0 ml	3.0 ml	3.0 ml
10% NaOH	3.0 ml	3.0 ml	3.0 ml

摇匀，静置10分钟，向各管中加入10% HCl 3ml,加1%淀粉液1滴呈兰色，分别用0.02mol/L Na2S2O3滴定至溶液呈亮绿色为止。

【 实验结果与计算 】

肝脏生成的酮体量（mmol/g）=(C－A)×Na 2 S 2 O 3 的摩尔数×1/6

肌肉利用的酮体量（mmol/g）=(C－B)×Na 2 S 2 O 3 的摩尔数×1/6

A: 滴定样品1消耗的Na 2 S 2 O 3 ml数。

B: 滴定样品2消耗的Na 2 S 2 O 3 ml数。

C: 滴定样品3消耗的Na 2 S 2 O 3 ml数。

【 思考 】